有限稀釋法

有限稀釋法

有限稀釋法是一種常用的克隆方法,將需要再克隆的細胞株自培養孔內吸出並作細胞計數,計出1mL的細胞數。

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正文


用HT培養液稀釋,使細胞濃度為50~60個/mL,於96孔培養板中每孔加0.1mL(五六個細胞/孔)。接種2排,剩餘細胞懸液HT培養液作倍比稀釋,再接種2排,如此類推,直至使每孔含0.5~1個細胞。培養7~10d后,選擇單個克隆生長的陽性孔再一次進行克隆。一般需要如此重複3~5次,直至達100%陽性孔率時即可,以確保抗體由單個克隆所產生。