亞硝酸鈉法

1.原理 芳香伯胺類藥物，在鹽酸存在下，能定量地與亞硝酸鈉產生重氮化反應。

反應式：

2.滴定條件

(1)酸的種類及濃度

1.重氮化反應的速度與酸的種類有關，在HBr中比在HCl中為快，在硝酸或硫酸中則較慢，但因HBr的價格較昂，故仍以HCl最為常用。此外，芳香伯胺類鹽酸鹽的溶解度也較大。

2.重氮化反應的速度與酸的濃度有關，一般常在1～2mol/L酸度下滴定，這是因為酸度高時反應速度快，容易進行完全，且可增加重氮鹽的穩定性。如果酸度不足，則已生成的重氮鹽能與尚未反應的芳伯胺偶合，生成重氮氨基化合物，使測定結果偏低。

當然，酸的濃度也不可過高，否則將阻礙芳伯胺的遊離，反而影響重氮化反應的速度。

(2)反應溫度

重氮化反應的速度隨溫度的升高而加快，但生成的重氮鹽也能隨溫度的升高而加速分解。另外，溫度高時HNO2易分解逸失，導致測定結果偏高。實踐證明，溫度在15℃以下，雖然反應速度稍慢，但測定結果卻較準確。如果採用“快速滴定”法，則在30℃以下均能得到滿意結果。

(3)滴定速度

快速滴定法：

將滴定管的尖端插入液面下約2/3處，用亞硝酸鈉滴定液迅速滴定，隨滴隨攪拌，至近終點時，將滴定管的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液併入溶液中，繼續緩緩滴定，至永停儀的電流計指針突然偏轉，並持續1分鐘不再回復，即為滴定終點。

(4)苯環上取代基團的影響

苯胺環上，特別是在對位上，有其它取代基團存在時，能影響重氮化反應的速度。

（1）親電子基團，如硝基、、-COOH、-X等，使反應加速。

（2）斥電子基團，如甲基、-OH、-OR等，使反應減慢。

（3）對於慢的重氮化反應常加入適量KBr加以催化。

芳仲胺類化合物，也可用滴定液滴定，但所起反應並不是重氮化，而是亞硝基化，

反應量的關係仍然是1：1。習慣上把這種測定方法叫做亞硝基化滴定，以別於重氮化滴定。

1.外指示劑 亞硝酸鈉法常用的外指示劑是含氯化鋅的碘化鉀-澱粉糊或者試紙，其中氯化鋅起到防腐作用。指示終點的原理是在化學計量點后，稍過量的亞硝酸鈉將KI氧化為碘單質。生成的碘單質與澱粉作用顯藍色。需要注意的是，滴定時，不能直接把指示劑加到被滴定的溶液里，否則，滴入的亞硝酸鈉先與KI作用，不能指示終點。因此，只能在臨近終點時，用玻璃棒蘸取少許被滴定的溶液，在外面與指示劑作用，依據是否出現藍色判斷反應終點。

2.內指示劑 應用較多的有橙黃IV-亞甲藍中性紅，亮甲酚藍及二苯胺。使用內指示劑操作雖然簡便，但有時候重點不敏銳，尤其重氮鹽有色時更難觀察。

3.永停滴定法 藥典多用永停滴定法指示終點，重氮化滴定時可以得到準確的分析結果。

1.配製 間接法配製

2.標定 用基準對氨基苯磺酸標定，以永停法指示終點。

3.貯藏 置玻璃塞的棕色玻瓶中，密閉保存。

1.將滴定管尖端插入液面處進行滴定，是一種快速滴定法。

2.重氮化溫度應在15～30℃，以防重氮鹽分解和亞硝酸逸出。

3.重氮化反應須以鹽酸為介質，因在鹽酸中反應速度快，且芳伯胺的鹽酸鹽溶解度大。在酸度為1～2mol/L下滴定為宜。

4.近終點時，芳伯胺濃度較稀，反應速度減慢，應緩緩滴定，並不斷攪拌。

5.永停儀鉑電極易鈍化，應常用濃硝酸（加1～2滴三氯化鐵試液）溫熱活化。

6.亞硝酸鈉滴定液應於玻塞棕色玻璃瓶中避光保存。

重氮化法主要適用於芳伯胺類藥物的測定（如：磺胺類藥物，鹽酸普魯卡因，苯佐卡因，氨苯碸等）；亞硝基化主要適用於芳仲胺類藥物（如：鹽酸丁卡因等）；此外，某些化合物（如：芳香族硝基化合物，芳醯胺等）經化學處理能轉化為芳伯胺，也可用重氮化滴定法進行測定。