多聚酶鏈反應

多聚酶鏈反應

多聚酶鏈反應是一種對特定的DNA片段在體外進行快速擴增的新方法。1985年美國PE-Cetus公司人類遺傳研究室的Mullis 等發明了具有劃時代意義的聚合酶鏈反應。該方法一改傳統分子克隆技術的模式操作簡便,在數小時內可使幾個拷貝的模板序列甚至一個DNA分子擴增數倍,大大提高了DNA的得率。已廣泛應用到分子生物學研究的各個領域。

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正文


引物設計的基本原則是最大限度地提高擴增效率和特異性,同時儘可能抑制非特異性擴增。反應中的引物至少應含有18個與模板序列完全互補的核苷酸(常用軟體通常默認為20個),最大不能多於38個,否則最適延伸溫度會超過TaqDNA聚合酶的最適溫度(74℃),不能保證PCR擴增產物的特異性這樣才能保證擴增反應的特異性。