電泳遷移率變動分析

電泳遷移率變動分析

用放射性同位素標記待檢測的片段(即探針DNA),然後與細胞提取物共溫育,形成DNA-蛋白複合物,將該複合物加到非變性聚丙烯醯胺凝膠中進行電泳。

定義


電泳遷移率變動分析,又稱凝膠阻滯實驗,英文名electrophoretic mobility shift assay,簡稱EMSA。是體外利用電泳遷移率的變化來分析DNA與蛋白質相互作用的一種特殊的凝膠電泳技術。

實驗方法


通常用32P標記DNA分子,而不標記蛋白質。電泳結束后,用放射自顯影技術顯現具放射性標記的DNA條帶位置。如果細胞蛋白提取物中不存在與同放射性標記的DNA探針結合的蛋白質,那麼所有放射性標記都將出現在凝膠的底部;反之,將會形成DNA-蛋白質複合物,由於受到凝膠阻滯的緣故,放射性標記的DNA條帶就會出現在凝膠的不同部位。

應用


徠1.用於研究特定的轉錄因子以及轉錄因子所結合的順勢作用元件。
2.用於研究與蛋白質相結合的DNA的序列的特異性。
3.評估突變對探針DNA與結合蛋白相互作用的影響。
4.用於研究DNA-foot printing。