Chromsome walking
Chromsome walking
簡介
從第一個重組克隆插入片段的一端分離出一個片段作為探針從文庫中篩選第二個重組克隆，該克隆插入片段含有與探針重疊順序和染色體的其他順序。從第二個重組克隆的插入片段再分離出末端小片段篩選第三個重組克隆，如此重複，得到一個相鄰的片段，等於在染色體上移了一步從第二個重組克隆的插入片段再分離出末端小片段篩選第三個重組克隆，如此重複，得到一個相鄰的片段，等於在染色體上移了一步，故稱之為染色體步移（Chromosome Walking）
目錄
名稱
染色體步移(chromosome walking)
在克隆基因組基因時，已知該基因在染色體上的位置但沒有該基因的序列信息，無法製備相應的探針，因此無法直接篩查文庫去克隆基因。此時，如果知道離開該基因一定距離上的DNA序列，則可用這個DNA序列作探針，通過染色體步移來逐步接近並最後達到待克隆的基因。其基本原理是用探針篩查文庫，得到陽性克隆后，將這個重組載體中的插入片段分離出來，然後用這個片段的末端部分(注意不能包含重複序列)作為新一輪篩查文庫的探針；得到新的重組載體中的插入片段，同上一個插入片段的末端部分(即探針序列)是重疊的，共有的。也就是這兩個片段是在同一條染色體上相互鄰接的。於是，再用新得的插入片段的末端部分作為探針，再去篩查文庫。通過一系列的操作，得到的插入片段逐漸連接延伸，最後可以步移到待克隆的基因。當然，在具體操作過程中還必須設計具體的方法，如同時構建跳步文庫(jumping library)和連接文庫(lnking library)等，使插入片段朝著一個方向步移。