差示分光光度法

分光光度法中，樣品中被測組分濃度過大或濃度過小(吸光度過高或過低)時，測量誤差均較大。為克服這種缺點而改用濃度比樣品稍低或稍高的標準溶液代替空白試劑來調節儀器的100%透光率（對濃溶液）或0%透光率（對稀溶液）以提高分光光度法精密度、準確度和靈敏度的方法，稱為差示分光光度法。

差示分光光度法又可分高吸光度差示法，低吸光度差示法，精密差示分光光度法等。

設用作參比的標準溶液濃度為 c，待測溶液濃度為 c，且 c> c，根據朗伯—比耳定律得到

A=εcb

A=εcb

兩式相減：

A=A-As

= εb（c-c）= εbΔc

用已知濃度的標準溶液作參比，調節其吸光度為零（透光率100%），然後測量待測溶液的吸光度。這時測得的吸光度實際是這兩種溶液吸光度的差值（相對吸光度）。從上式可知，所測得的吸光度差值與這兩種溶液的濃度差成正比。這樣便可以把空白溶液為參比的稀溶液標準曲線作為 ΔA對應於 Δc的工作曲線，根據測得的 ΔA找出相應的 Δc值，從 c= c+ Δc，便可求出待測溶液之濃度，這就是示差法定量測定的基本原理。