X-Gal
X-Gal
X-gal也稱5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactopyranoside或5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactoside,X-Gal是β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的顯色底物,在β-半乳糖苷酶的催化下會產生藍色產物。常用於β-半乳糖苷酶的原位染色檢測以及藍白斑篩選。
X–gal是β–半乳糖苷酶(β–galactosidase)的底物,水解后呈藍色。基於這個特點,pUC系列載體DNA(或其他帶有lacZ基因載體DNA)以lacZ 缺失細胞為宿主進行轉化時、或用M13噬菌體載體DNA進行轉染時,如果在平板培養基中加入X–gal和IPTG,由於β–半乳糖苷酶的α–互補性,可以根據是否呈現白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑選出基因重組體。
首先把X-gal配製成20 mg/ml的二甲基甲醯胺(DMF)溶液(-20℃避光保存),然後在100 ml的瓊脂培養基中,加入200 μl的上述溶液、100 μl的IPTG(24 mg/ml)和100 μl的Amp(100 mg/ml),製作成X-gal、IPTG、Amp平板培養基。當DNA片段插入至pUC系列載體(或其他帶有lacZ、Amp基因載體),然後轉化至lacZ缺失細胞中后,塗布上述的X–gal、IPTG、Amp平板培養基,可根據長出菌體的藍白色,而方便地挑選出基因重組體(白色為具有DNA插入片段的基因重組體)。
培養噬菌體時,Top agar中的添加量為:50 μl/3 ml(20mg/ml)。
含有X-gal的培養基4℃避光保存,須在1~2周內使用。