免疫親和

byimmuno-affinitychromatography;immunoaffinitychromatography;byimmunoaffinitychromatography;

1.1　免疫親和層析產生背景

殘留檢測的確證方法主要是儀器分析法，如LC-MS、GC-MS或HPLC,這些方法中因殘留組分絕對量很小，檢測方法需要較高靈敏度和準確性。樣品前處理是檢測技術的核心，傳統的樣品凈化技術主要有液—液分配(LLE)、固相萃取(SPE)、基質固相分散(MSPD)、超臨界萃取(SFE)等。但是這些凈化技術通常需要多個凈化步驟，缺乏選擇性，不但費時繁瑣、容易污染、損失樣本且會引起嚴重的本底干擾，降低結果的可靠性。因此建立高效的樣本凈化技術已成為痕量分析的主要問題。最近20年，固相提取領域研究的不斷深入，推進了從分析物中選擇性萃取目標產物為目的的新技術發展(Hennion等,2003)。

免疫親和層析(Immunoaffinity Chromatography,IAC)提供了一個有效的方法，從液體材料中進行選擇凈化、化合物濃縮、分類，然後從固相支持物中提取純化樣本。20世紀60年代末溴化氰活化瓊脂糖載體開始(Axen等,1967),IAC成為免疫化學中最有效分離手段之一。

Van等(1987)首次應用IAC技術凈化了豬肉中的氯黴素隨後1989年又在此技術基礎上測定了蛋、牛奶(Van,1989)中的氯黴素。其現在已成為醫藥、獸葯、食品檢測中，前處理方法應用的重要手段。

這項技術在獸葯殘留中的應用特別廣泛，包括豬肉中的磺胺類藥物、血漿中克侖特羅、血清中二惡英等。生物樣本中愛比菌素應用免疫親和層析的回收率也可達到80%～86%(LJS,1996)。

1.2　免疫親和層析技術原理

IAC也是色譜技術的一種，可稱為免疫色譜技術，是一種利用抗原抗體特異性可逆結合特性的SPE技術，根據抗原抗體的高選擇性，從複雜的待測樣品中提取目標化合物。主要原理是將抗體與惰性微珠共價結合，然後裝柱，將抗原溶液過免疫親和柱，而非目標化合物則沿柱流下，最後用洗脫緩衝液洗脫抗原，從而得到純化的抗原，用適當的緩衝液和合適的保存方法，柱可以再生備用。其提純效率很高，通常只需一次就可達到1000～10000倍的純化效果(王澤永,2002)。