末代御醫

杜仲

演員郭晉安

京城大藥行“良濟贊堂”駐診中醫師/太醫院御醫

醫術高明，恃才傲物，極具自信，表面不近人情，實則外冷內熱。被李鴻章引薦為慈禧太后醫治怪病，憑其過人觀察力查出病因，令慈禧不藥而癒，破格封為御醫。在機緣巧合下揭破光緒被人慢性下毒，得到光緒信任。卻因而觸動朝野敵對勢力，捲入連場政治風暴。

茯苓

演員楊怡

跌打館“存仁館”繼承人

為人熱血，抱打不平，豪氣爽朗。伏苓被逼將嫁給杜仲作妾侍，成親當晚與人私奔。情郎一走了之，茯苓加入了革命黨。后回到京城暗中收集情報，並求杜仲代引薦為權貴效勞。伏苓與杜仲一起鑽研醫理，互生情愫，礙於杜仲早有妻室，加上自己革命黨員身份，伏苓苦苦壓抑，不敢向杜仲表露真情。

慈禧

演員羅蘭

慈禧聞得有人對她施以厭勝之術，因憂心而引發夢遊症。醒后發現身體出現不明瘀傷，以為自己患上怪病。杜仲入宮後為慈禧解開心結。又在杜仲引薦之下，獲得伏苓為她治療風濕頑疾。

八國聯軍入京，慈禧帶同光緒倉皇逃亡，卻拒讓珍妃同行，間接造成珍妃墮井身亡。

光緒皇帝

演員敖嘉年

幼年被慈禧立為皇帝，一直受制於慈禧。推行戊戌變法意圖失敗，自此被幽禁於瀛台。杜仲發現他被人暗中下毒，救回一命。在杜仲與伏苓的幫助下，終於與珍妃重聚。八國聯軍攻入北京，慈禧攜同光緒逃到西安，卻拒帶珍妃同行。事後珍妃被發現墮井身亡，光緒認定她受人所害。光緒為了找出殺害珍妃的兇手而回復鬥志。

珍妃

演員朱晨麗

珍妃關心國家，常跟光緒討論政事。此舉引起慈禧不滿，借戊戌變法失敗將其幽禁於紫禁城。珍妃無意間遇上伏苓，得其相助與光緒見面，但事情被揭發觸怒慈禧，幸得杜仲暗中幫助。杜仲更說服慈禧，讓珍妃遷往瀛台，回到光緒身邊。珍妃希望為光緒誕下龍種，為皇后隆裕得悉並暗中破壞，居中挑撥事非。八國聯軍入京，珍妃投井而亡。

洪百合

演員賈曉晨

百合父親為大藥行老闆，百合年幼時一次患病高燒過後，下半身以至雙腿癱瘓，遍尋名醫仍無法醫好。由於身體殘障，百合嫁幸無期。此時杜仲（郭晉安飾）父親得罪權貴含冤下獄，得百合父親奔走營救，杜仲為了報恩，遵從父親之意迎娶百合。百合嫁入杜家后，對杜仲千依百順，惜杜仲對她缺乏愛意，令百合耿耿於懷。

載灃

演員張穎康

光緒親弟，自覺比光緒能力更強，眼見光緒幸運地被慈禧選立為皇，心中感到不忿。遭遇德國公使在“義和團”之亂中被殺害，載灃代表滿清出使德國道歉，面前的西方先進文明令他大開眼界。載灃懷著匡扶滿清宏大理想回國，眼見光緒因珍妃之死變得一厥不振，於是萌生出取而代之的念頭。

葛根

演員林子善

葛根自幼隨母親在伏家之跌打館打工，跟伏苓父學習跌打手藝，與伏苓青梅竹馬長大，二人感情深厚。遭遇伏苓不願從父命嫁給名醫杜仲為妾，事後更與情郎私奔，下落不明。其後伏父過世，跌打館被貪婪大師兄強佔，伏苓家孤寡被逼遷往葛根家暫住，過著寄人籬下的生活。

任錫庚

演員張景淳

錫庚知識廣博，大凡有人向他請教醫學問題，都會不厭其煩，滔滔不絕詳加講解，“太醫院”中所有人都將他當成一本活的“醫學全書”。錫庚有著輕微“強迫症”，一旦見到東西放置不夠整齊，便覺心情煩躁，非要將所有東西按他意願重新排列妥當不可。