T4 DNA聚合酶

T4DNAPolymerase，即T4DNA聚合酶，是一種模板依賴的DNA聚合酶，可以在結合有引物的單鏈DNA模板上，從5'→3'方向催化DNA合成反應。T4DNAPolymerase具有3'→5'外切酶活性，但不具有5'→3'外切酶活性。

特點：T4DNAPolymerase由於同時具有5'→3'DNA聚合酶活性和3'→5'DNA外切酶活性，可以用於將5'端突出末端補平或3'端突出末端削平。T4DNAPolymerase的3'→5'DNA外切酶活性對於單鏈DNA要比雙鏈DNA活性更高，即單鏈DNA要比雙鏈DNA中的非配對鏈部分更容易被T4DNAPolymerase所消化。T4DNAPolymerase的3'→5'外切酶活性比KlenowFragment要高約200倍。

用途：T4DNAPolymerase可用於催化以下反應：DNA5'或3'突出末端的平滑化；通過置換反應進行標記DNA探針合成；定點突變過程中第二鏈的合成；不依賴於連接反應的PCR產物克隆。

來源：本T4DNALigase由大腸桿菌表達，表達基因的來源為T4嗜菌體。

活性定義：37℃30分鐘時間內，催化10nmol脫氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定義為1個活性單位。

活性檢測條件：67mMTris-HCl(pH8.8)，6.7mMMgCl2，1mMDTT，16.7mM(NH4)2SO4，0.2mg/mlBSA，0.033mMofeachdNTP，0.4MBq/ml[3H]-dTTP，0.2mM熱變性且經DNA酶部分消化過的小牛胸腺DNA。

純度：不含DNA內切酶，不含RNase。

酶儲存溶液：20mMpotassiumphosphate(pH7.5)，200mMKCl，2mMDTT，and50%glycerol。

ReactionBuffer(5X)：335mMTris-HCl(pH8.8at25℃)，33mMMgCl2，5mMDTT，84mM

(NH4)2SO4。

緩衝液兼容性：在碧雲天的內切酶反應緩衝液1XO、1XR、1XY、2XY中的活性為100%，在1XB、1XG中的活性為75-100%。

失活或抑制：70℃加熱10分鐘可使T4DNAPolymerase失活。金屬離子螯合劑可以抑制T4DNAPolymerase的活性。