寡聚核苷酸
鹼基短鏈核苷酸的總稱
寡核苷酸,是一類只有20個以下鹼基的短鏈核苷酸的總稱(包括脫氧核糖核酸DNA或核糖核酸RNA內的核苷酸),寡核苷酸可以很容易地和它們的互補對連結,所以常用來作為探針確定DNA或RNA的結構,經常用於基因晶元、電泳、熒光原位雜交等過程中。
寡核苷酸合成的DNA(脫氧核糖核酸)可以用於鏈聚合反應,能擴增確定幾乎所有DNA的片段,在這個過程中寡核苷酸是作為引物,和DNA 中標的的互補片段結合,作成DNA的複製品。
調控寡核苷酸用於抑制RNA片段,防止其翻譯成蛋白,在制止癌細胞活動方面能起一定的作用。
是由加拿大的生物化學家M·史密斯(Michael Smith,1932—)發明的。其基本原理如下:
應用寡聚核苷酸進行DNA的定點誘變時,首先要把含有待突變的DNA片斷段克隆到MI3噬菌體載體中,MI3噬菌體的正鏈可以感染具有纖毛的細菌,並在細菌體內進行複製后,以出芽的形式形成新的帶有正鏈DNA的噬菌體。而存留在菌體內的則是雙鏈狀態的複製型MI3。受MI3噬菌體感染的細菌長生速度減慢,在細菌培養皿上會形成透明的噬菌斑。
將目的DNA插入到複製型MI3的多克隆位點上,去轉染細菌,提取單鏈DNA作為突變的模板。根據需要設計併合成帶有突變核苷酸序列的寡聚核苷酸引物,使與帶有目的DNA的單鏈MI3模板雜交,然後加入DNA聚合酶和4種脫氧核糖核苷酸,使雜交上的突變引物延伸,並用DNA連接酶使新合成的DNA成環狀,再去轉染細菌。可用DNA序列分析的方法從所得到的噬菌體中篩選出帶有突變DNA序列的突變體。在製備出含有突變體的複製型DNA后,可以用突變的DNA片段置換未突變的DNA相應的區段,從而得到完整的DNA突變體。