Oligo(dT)

應用

1.Oligo(dT) capture

因為Oligo(dT)與mRNA的Poly(A)尾巴可以發生特異性結合，所以用Oligo(dT)特異結合到mRNA上Poly(A)尾端，以此可以特異地將mRNA從總RNA中分離出來。屬於親和層析技術。

2.反轉錄（RT-PCR）

因絕大多數真核細胞mRNA 3’端具有Poly(A)尾，Oligo(dT)與其配對，僅mRNA可被反轉錄。由於Poly(A) RNA僅佔總RNA的1-4%，故此種引物合成的cDNA比隨機六聚體作為引物所得到的cDNA在數量和複雜性方面均要小。但是在反轉錄從mRNA獲得cDNA時，也可以用隨機六聚體引物和特異性引物。

隨機六聚體引物：當特定mRNA由於含有使反轉錄酶終止的序列而難於拷貝其全長序列時，可採用隨機六聚體引物這一不特異的引物來拷貝全長mRNA。用此種方法時，體系中所有RNA分子全部充當了cDNA第一鏈模板，PCR引物在擴增過程中賦予所需要的特異性。通常用此引物合成的cDNA中96%來源於rRNA。

特異性引物：最特異的引發方法是用含目標RNA的互補序列的寡核苷酸作為引物，若PCR反應用二種特異性引物，第一條鏈的合成可由與mRNA 3’端最靠近的配對引物起始。用此類引物僅產生所需要的cDNA，導致更為特異的PCR擴增。