溶血空斑是將綿羊紅細胞免疫的家兔或小鼠，取家兔淋巴結或小鼠脾細胞製成細胞懸液，與高濃度綿羊紅細胞混合后加入瓊脂糖凝膠中，其中每個釋放溶血性抗體的B淋巴細胞在補體的參與下可溶解周圍的綿羊紅細胞，在周圍形成一個可見的空斑，一個空斑代表一個抗體形成細胞，空斑的數量反映機體的體液免疫功能。
現在常用的為SPA-SRBC溶血空斑試驗。SPA能與人及多數哺乳動物IgG的
Fc段呈非特異性結合，利用這一特徵，首先將SPA包被SRBC，然後進行溶血空斑測定，可提高
敏感度和應用範圍。在該測試系統中，加入抗人Ig抗體，可與受檢細胞產生的
免疫球蛋白結合形成複合物，複合物上的Fc段可與連接在SRBC上的SPA結合，同時激活補體，使SRBC溶解形成空斑。