EcoRI（“I”是“1”的意思）是一種限制性核酸內切酶，來自某些特定品系的大腸桿菌（E. coli，也是其名稱由來），是此種細菌體內參與限制修飾系統的酶。
EcoRI限制酶能專一識別GAATTC序列，並在G和A之間將這段序列切開
切割后的小片段端點為5'端突出的黏狀末端（sticky end）。
—G↓AATTC—
—CTTAA↓G—
切割后的小片段端點為5'端突出的黏狀末端
| E | Escherichia | （屬） |
| co | coli | （種） |
| R | RY13 | （品系） |
| I | 首先發現 | 在此類細菌中發現的順序 |
即為從大腸桿菌R菌株中分離出來的第一種限制酶。
屬第二型限制酶，只具有認知切割的作用，修飾作用由其他酶進行。