ssh

它能夠快速、簡便地分離和鑒定不同細胞系、不同組織或同一細胞系、同一組織在不同條件下的差異表達基因。

SSH 技術的主要原理是以抑制性PCR 為基礎的cDNA 差減雜交。當使用與2 個不同接頭序列互補的引物進行PCR 擴增時，無差異表達基因的cDNA 由於兩端存在著反向重複序列，退火過程中容易產生類似髮夾的互補結構，無法作為模板與引物配對，從而達到選擇性地抑制非目的基因的擴增，而差異表達基因的cDNA 則可以有效擴增的目的。同時，運用雜交二級動力學原理，使得在丰度上有差別的單鏈cDNA，在變性后再復性的過程中達到均一化富集，從而消除目的基因間的丰度差異。

SSH 技術操作的流程如下： ①分別提取2 種不同細胞（受試方： Tester；驅動方： Driver）的mRNA並反轉錄為cDNA； ②分別用RsaI 酶切割處理后，將Tester cDNA 分為相等的2 份，並與2 個不同序列的接頭連接； ③將上述加接頭的cDNA 分別與過量的Driver cDNA 混合，變性後退火雜交； ④兩種抑制性PCR 擴增與接頭相連的Tester cDNA 分子； ⑤PCR產物克隆純化，構建差減文庫並對文庫進行篩選、驗證。