Southern-blot
Southern-blot
Southern blot 是一種常用的 DNA 定量的。
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其原理是將待測的 DNA 樣品固定在固相載體(硝酸纖維膜或尼龍膜)上,與標記的核酸探針進行雜交,在與探針有同源序列的固相 DNA 的位置上顯示出雜交信號,通過檢測信號的有無、強弱可以對樣品定性、定量,從而計算出轉入的拷貝數。 Southern 法準確性高、特異性強,但存在費時費力的缺點。另外,由於 Southern 法檢測不經過靶片段的擴增( PCR ),一般每個電泳通道需要 10-30 μ g 的 DNA ,在實際操作中就需要較大量的植物材料來提取 DNA ,而轉基因植物的愈傷組織在無菌條件下經過篩選、重新分化后一般都比較細弱,不宜大量取樣。如果,造成限制性酶切位點丟失, Southern 法也到。這些因素都制約了 Southern 法在 T 0 代轉基因植物中。