熒光物

許多物質都可產生熒光現象，但並非都可用作熒光色素。只有那些能產生明顯的熒光並能作為染料使用的有機化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染料。常用的熒光色素有：

1.異硫氰酸熒光素（FITC）：為黃色或橙黃色結晶粉末，易溶於水或酒精等溶劑。分子量為389.4，最大吸收光波長為490～495nm，最大發射光波長520～530nm，呈現明亮的黃綠色熒光。其主要優點是：①人眼對黃綠色較為敏感；②通常切片標本中的綠色熒光少於紅色。

2.四乙基羅丹明（RB200）：為橘紅色粉末，不溶於水，易溶於酒精和丙酮。性質穩定，可長期保存。最大吸收光波長為570nm，最大發射光波長為595～600nm，呈橘紅色熒光。

3.四甲基異硫氰酸羅丹明（TRITC）：最大吸引光波長為550nm，最大發射光波長為620nm，呈橙紅色熒光。與FITC的翠綠色熒光對比鮮明，可配合用於雙重標記或對比染色。其異硫氰基可與蛋白質結合，但熒光效率較低。

4.藻紅蛋白（R-RE）：本品為無定形，褐紅色粉末，不溶於水，易溶於酒精和丙酮，性質穩定，可長期保存。最大吸引光波長為565nm，最大發射光波長為578nm，呈明亮的橙色熒光。與FITC的翠綠色熒光對比鮮明，故被廣泛用於對比染色或用於兩種不同顏色的熒光抗體的雙重染色。

1.酶作用后產生熒光的物質：某些化合物本身無熒光效應，一旦經酶作用便形成具有強熒光的物質。例如4-甲基傘酮-β-D半乳糖苷，受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基傘酮，後者可發出熒光，激發光波長為360nm，發射光波長為450nm。其他如鹼性磷酸酶的底物4-甲基傘酮磷酸鹽和辣根過氧化物酶的底物對羥基苯乙酸等。

2.鑭系螯合物：某些3價稀土鑭系元素如銪（）、鋱（）、鈰（）等的螯合物經激發后也可發射特徵性的熒光，其中以應用最廣。螯合物的激發光波長範圍寬，發射光波長範圍窄，熒光衰變時間長，最適合用於分辨熒光免疫測定。