液氮保藏法

菌種保藏的方法

液氮保藏法,亦稱超低溫保藏法。主要利用微生物在低於-130°C的低溫下新陳代謝趨於停止的原理,在液氮中(-196°C的超低溫下)有效地進行菌種保藏的方法。此法操作簡便、高效,保藏期一般可達到15年以上,是目前公認的菌種長期保藏技術之一,並且適用於各類微生物菌種的保藏。但是,採用液氮保藏,需購置超低溫液氮設備,且液氮消耗量大,費用高。液氮低溫保藏的保護劑,一般選擇甘油二甲基亞碸糊精血清蛋白、聚乙烯氮戊環、吐溫80等,最常用的是甘油(10%〜20%),不同微生物應選擇不同的保護劑,保護劑的濃度應控制在不造成微生物死亡為宜。

操作方法


把微生物細胞混懸於含保護劑(20%甘油,10%DMSO等)的液體培養基中(也可把含菌瓊脂塊直接浸入含保護劑的培養液中),分裝入耐低溫的安瓿瓶中后,作緩慢預冷,然後移至液氮罐中的液相(-196℃)或氣相(-156℃)作長期超低溫保藏。

操作原則


“慢凍快溶”。

原理


利用微生物在-130℃以下新陳代謝趨於停止而有效地保藏微生物。
0.5mol/L左右的甘油或二甲亞碸(dimethyl sulfoxide,DMSO)可透入細胞,並通過降低強烈的脫水作用而保護細胞。

優缺點


優點

保藏期長(15年以上),且適合保藏各類微生物,尤其適宜於保存難以用冷凍乾燥保藏法保藏的微生物,如支原體、衣原體、不產孢子的真菌、微藻和原生動物等。

缺點

需要液氮罐等特殊設備,且管理費用高、操作較複雜、發放不便等。