T4-DNA連接酶

同時T4DNA連接酶可以修補雙鏈DNA、雙鏈RNA或DNA/RNA雜合物上的單鏈缺口(single-strand nicks)。T4DNA連接酶在分子生物學中有廣泛的應用。T4DNA連接酶是經原核表達，柱層析純化獲得的高純T4DNA接酶，SDS-PAGE顯示為一條62kD的蛋白條帶。本品附帶10xLigationBuffer含有ATP。適用於DNA片斷接、克隆等各種反應。

連接條件：

推薦在10~20μl反應體系中進行接反應，反應中DNA濃度最大可達1mM（1kbDNA約1mg/ml）。首先混合要接的DNA片段，加入10×Ligase Buffer至終濃度為1×，再加入適量T4DNA Ligase混勻。最適連接溫度為16℃。粘末端連接效率較高，加入0.2~1μl T4DNA Ligase,可在室溫或16℃反應1~3小時完成反應；平末端連接效率較低，加入1μl T4DNA Ligase，通常需要在16℃或4℃過夜完成反應。

注意事項：

1)10×LigaseBuffer含有ATP，使用前應在室溫放置至融化或用手掌溫度輔助融化，然後置於冰上。不要加熱融化以免ATP降解。

2)T4DNA Ligase對熱敏感，容易失活。使用時請放置冰上，用后立即置冰箱中冷凍保存。

3)如需在接反應后滅活T4DNA Ligase，可於65℃孵育10min即可。

4)10×LigaseBuffer不宜反覆凍融，建議分裝。