二倍體細胞

二倍體細胞（diploid cell）

含有兩個染色體組的細胞，通常以2n表示體細胞的染色體數目，用n表示性細胞的染色體數目。

二倍體細胞株來源於正常人胎兒組織，主要用於培養病毒製備疫苗等。

細胞株的要求

用於疫苗生產的人二倍體細胞株（以下簡稱細胞株）須按下列規定進行全面檢定。新建立細胞株，應按《新生物製品審批辦法》進行審批。

1.1　建立細胞株所用的胎兒的胎齡和性別，中止妊娠原因。

1.2　建立細胞株所用胎兒的父、母年齡、職業及健康狀況，胎兒父、母系三代應無明顯遺傳缺陷和腫瘤疾病歷史。在取胎兒組織時，應作出詳細調查，報衛生部審批前，應進行一次重複調查。

1.3　原始組織種類，原代培養的數量與生長狀況。

1.4　細胞培養史和生長特徵，細胞壽命、世代數。

1.5　細胞生長液的成分。

2.1　染色體的鑒定和製片

細胞原系建株過程，每8～12世代*應作一次染色體檢查，一株細胞整個生命期內連續培養過程中，至少應有4～5次染色體檢查結果。

每次染色體檢查，應從同一世代不同細胞培養瓶中取細胞混合再培養，製備染色體標本片。染色體標本應長期保存（直至褪色不能用為止），以備複查。

每次染色體檢查，至少應隨機取1000個分裂中期細胞，進行染色體數目、形態和結構檢查，並作出有助於複查的記錄，其中至少選擇50個分裂中期細胞進行顯微照相，作出核型分析。並應粗數500個分裂中期細胞，檢查多倍體的發生率。

可以G分帶或Q分帶技術檢查50個中期細胞染色體帶型，應用照相圖片作出帶型分析。以顯帶技術檢出的核型異常（假二倍體、倒位、易位等）發生率應用比現用上限更寬的基本數據進行評價，合格上限尚未定出。

2.2　外源因子檢查

細胞株不應有細菌、黴菌、支原體和病毒等污染。每8～12世代細胞培養物，應進行下列檢查。

2.2.1　細菌、黴菌、支原體檢查

按《生物製品無菌試驗規程》進行。

2.2.2　病毒檢查

2.2.2.1　細胞直接觀察及紅細胞吸附試驗

取混合瓶細胞樣品，接種小瓶或小管，長成單層后更換維持液，觀察2周，鏡檢細胞，應保持正常形態特徵。培養7天，用0.2%～0.5%雞和豚鼠混合紅細胞懸液進行紅細胞吸附試驗，先置於4～8℃，後置於20～25℃，各30分鐘，兩次觀察結果均應為陰性。

2.2.2.2　細胞培養檢查

細胞培養的上清液混合樣品，至少接種4種細胞（原代人腎或猴腎細胞、原代兔腎細胞、人源傳代細胞和另一批人二倍體細胞）。接種的樣品量應占維持液的20%以上，於培養5～7天和14天時，進行紅細胞吸附試驗（見2.2.2.1項）。培養7天的上清液在同種細胞培養上盲傳一代，觀察14天，應無細胞病變，紅細胞吸附試驗應為陰性（在該試驗的細胞維持液中，允許加入少量該細胞培養用的牛血清，以利細胞維持和觀察）。

2.2.2.3　動物試驗檢查

用乳鼠、成鼠、家兔、豚鼠和雞胚各一組。每組動物或雞胚接種受檢細胞不應少於107。按表2所列要求進行試驗和觀察。如80%以上動物和雞胚健存，此試驗為通過。

2.2.2.4　其他檢查

細胞株傳代過程中，至少於2個不同世代水平進行包涵體、乙型肝炎表面抗原及電鏡檢查，結果均應為陰性。