免疫沉澱法

研究蛋白質交互作用的生物技術

免疫沉澱法(Immunoprecipitation, IP)是一種研究蛋白質間交互作用的生物技術,這種技術是將蛋白質視為抗原,並利用抗體與之進行特異性結合的特性,來進行研究。這項技術可用來將含有上千種不同蛋白質的樣品中,分離和濃縮出特定蛋白質。進行免疫沉澱法時,抗體需要和一個受質結合。

類型


個別免疫沉澱法(IP):用來分離某個細胞萃取物中的已知特定蛋白質
免疫沉澱法
免疫沉澱法
免疫共沉澱法(Co-IP):研究整個蛋白質複合體
染色質免疫沉澱法(ChIP):用來研究DNA上的特定蛋白質
RNA免疫沉澱法(RIP):和ChIP相近,但RNA免疫沉澱法是用來研究會與RNA結合的蛋白質
RIP技術(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA結合蛋白免疫沉澱),是研究細胞內RNA蛋白結合情況的技術,是了解轉錄后調控網路動態過程的有力工具,能幫助我們發現miRNA的調節靶點。RIP這種新興的技術運用針對目標蛋白的抗體把相應的RNA-蛋白複合物沉澱下來,然後經過分離純化就可以對結合在複合物上的RNA進行分析。RIP可以看成是普遍使用的染色質免疫沉澱ChIP技術的類似應用,但由於研究對象是RNA-蛋白複合物而不是DNA-蛋白複合物,RIP實驗的優化條件與ChIP實驗不太相同(如複合物不需要固定,RIP反應體系中的試劑和抗體絕對不能含有RNA酶,抗體需經RIP實驗驗證等等)。RIP技術下游結合microarray技術被稱為RIP-Chip,幫助我們更高通量地了解癌症以及其它疾病整體水平的RNA變化。
Millipore基於磁珠的RIP實驗流程

基本原理


RIP 實驗基本原理:
1. 用抗體或表位標記物捕獲細胞核內或細胞質中內源性的RNA結合蛋白。
2. 防止非特異性的RNA的結合。
3. 免疫沉澱把RNA結合蛋白及其結合的RNA一起分離出來。
4.結合的RNA序列通過microarray(RIP-Chip),定量RT-PCR高通量測序(RIP-Seq)方法來鑒定。