軟瓊脂法

所謂克隆化是指使單個細胞無性繁殖而獲得該細胞團體的整個培養過程。克隆化的方法很多，其中就有軟瓊脂法。

軟瓊脂法

材料：

a.HT培養基（雙倍濃度）。

b.用0.15mol/LNaCl配製的2.0%瓊脂糖：稱取2.0g細胞培養用瓊脂糖，懸浮於100ml0.15mol/LNaCl，121℃高壓滅菌15分鐘，分裝10ml小瓶，冷卻后4℃保存。

c.小鼠腹腔細胞。

d.滅菌平皿。

e.45℃水浴。

f.活力很好的雜交瘤細胞。

方法：

a.在培養皿中製備飼養細胞（小鼠腹腔細胞）單層。

b.臨用前將2.0%瓊脂糖生理鹽水溶液與等量雙倍濃度的HT培養液混勻，配成1%瓊脂糖培養液，45℃水浴中溫育。

c.吸去平皿上層培養液，加入1%瓊脂糖培養液3ml，室溫10分鐘。

d.取雜交瘤細胞懸液1ml，加入1%瓊脂糖培養液1ml混勻，鋪於上層。

e.37℃、7.5%濕潤培養7-14天；克隆生長至2mm時，用毛細吸管吸出克隆，直接轉種於含有飼養細胞的24孔板，擴大培養。

f.吸取上清，檢測抗體，陽性孔可繼續克隆化，或擴大培養、凍存。