噬菌體抗體

（一）基本原理和程序 噬菌體抗體庫技術的原理，簡言之就是用PCR技術從人免疫細胞中擴增出整套的抗體重鏈可變區（VH）和輕鏈可變區（VL）基因，克隆到噬菌體載體上並以融合蛋白的形式表達在其外殼表面。這樣一來噬菌體DNA中有抗體基因的存在，同時在其表面又有抗體分子的表達，就可以方便地利用抗原—抗體特異性結合而篩選出所需要的抗體，並進行克隆擴增。使抗體基因以分泌的方式表達，則可獲得可溶性的抗體片段。在建庫過程中如果將VH和VI。隨機組合，則可建成組合抗體文庫；如果抗體mRNA來源於未經免疫的正常人，則可以在不需要細胞融合的情況下建立起人天然抗體庫。

構建噬菌體抗體庫通常包括以下幾個過程：①從外周血或脾、淋巴結等組織中分離B淋巴細胞，提取mRNA並反轉錄為cDNA；②應用抗體輕鏈和重鏈引物，根據建庫的需要通過PCR技術擴增不同的Ig基因片段；③構建噬菌體載體。噬菌體抗體庫載體有入噬菌體、絲狀噬菌體和噬菌粒三種，其中后二者是目前構建表面表達的噬菌體抗體庫（surfacedisplayantibody library）常用載體；④表達載體轉化細菌，構建全套抗體庫。通過多輪的抗原親和吸附—洗脫—擴增，最終篩選出抗原特異的抗體克隆。 （二）噬菌體抗體庫技術的特點 1．模擬天然全套抗體庫 抗體文庫可以達到或超過10 庫容，所以能包含B細胞全部克隆。建庫的外源基因來自人體外周血，骨髓或脾臟的淋巴細胞提取的mmDNA，mmDNA反轉錄形成cDNA，這些mRNA是人體多克隆細胞的總mRNA。使用的通用引物采自多個人體，具有人的種屬普遍性。抗體的VH和VL基因的隨機重組也增加了抗體的多樣性。 2．避免使用人工免疫和雜交瘤技術 由於抗體庫的大容量和極高的篩選效率，使得可以調出任意抗體基因，用基因工程方法製備抗體，從而避免了使用人工免疫動物和細胞融合技術。 3．可獲得高親和力的人源化抗體 在噬菌體抗體庫技術中，VH和VL基因的隨機重組模擬了體內抗體親和力成熟的過程，所用的抗體基因又來自人體，因此，所產生的抗體必然都是高親和力的人源化抗體。