細胞工程

全書共分3篇。第1篇為細胞工程基礎，主要概括介紹了細胞工程的發展和應用、基本設備及其使用和無菌技術等；第2篇為植物細胞工程，主要包括植物的快速繁殖與脫病毒、胚胎和胚乳培養、胚珠和子房培養與離體受精、花粉和花藥培養、植物細胞培養以及次生物質生產、原生質體培養與體細胞雜交和植物種質的超低溫保存技術等；第3篇為動物細胞工程，主要包括動物細胞培養的基本技術、細胞融合與雜交瘤技術、細胞重組與動物克隆以及幹細胞技術等。

本書可用作綜合院校、師範院校以及農林院校細胞工程課程的教材，也可供其他院校有關專業的相關課程選用或參考。

第1篇細胞工程基礎

第1章緒論1

11細胞工程的定義和基本內容1

12細胞工程中的基本技術2

121細胞培養技術2

122細胞融合技術3

123其他技術3

13細胞工程發展簡史3

131植物細胞工程的發展3

132動物細胞工程的發展4

14細胞工程的主要應用5

141植物細胞工程的應用5

142動物細胞工程的應用6

思考題7

第2章細胞工程中的常用設備8

21細胞工程實驗室常用部分儀器設備8

211水純化裝置8

212超聲波清洗器8

213蒸汽壓力滅菌器9

214乾熱滅菌設備10

215過濾除菌裝置10

216超凈工作台12

217培養箱12

218搖床13

219移液器13

2110顯微鏡14

2111顯微操作儀14

2112冷凍存儲設備15

2113血球計數板15

22常用器皿16

221培養器皿16

222金屬器械17

23常用培養用品的清洗17

231玻璃器皿的清洗17

232橡膠製品的清洗17

233除菌濾器的清洗18

234塑料器皿的清洗18

235金屬器械的清洗18

236其他18

237常用洗滌液的種類和配製18

思考題19

第3章無菌技術20

31常用滅菌方法及原理20

311熱力滅菌20

312電離輻射滅菌22

313紫外線殺菌23

314過濾除菌23

315化學殺菌23

32無菌操作注意事項24

321無菌操作室的消毒24

322常見污染原因和預防措施25

33實驗室生物安全26

思考題27第2篇植物細胞工程

第4章植物細胞工程的基本原理和

技術基礎28

41植物細胞工程的基本原理28

411植物細胞的全能性28

412植物激素的調控作用28

42植物細胞和組織培養所需的營養和

環境條件29

421培養基的組成和配製29

422影響植物組織培養的環境條件32

43外植體的選擇及消毒33

431外植體的選擇33

432植物材料的消毒34

44外植體的切取和培養36

441外植體的切取36

442外植體的接種和培養36

思考題37

51植物的快速繁殖技術38

511快速繁殖的一般技術38

512無糖組織培養技術42

513快速繁殖中應注意的問題45

514快繁實例：月季快繁47

52植物工廠化育苗47

521工廠化育苗的概念和基本特點47

522工廠化育苗的一般程序48

523工廠化育苗的主要設施48

524操作實例：葡萄試管苗的快速繁殖及工廠化育苗49

思考題56

第6章植物的胚胎培養57

61植物的胚胎培養57

611成熟胚的培養57

612幼胚的培養58

613植物胚胎培養的應用61

62胚珠和子房培養62

621胚珠培養62

622子房培養63

623未傳粉子房和胚珠培養產生單

倍體64

63離體授粉65

631離體授粉技術的基本過程65

632影響離體授粉成功的因素66

633離體授粉技術在雜交育種上的

應用67

634操作實例：小麥雌蕊的離體

授粉67

64離體受精68

641雌雄配子分離68

642誘導融合69

643合子培養70

65胚乳培養71

651胚乳培養的基本過程72

652影響胚乳培養的主要因素73

653操作實例：大麥的胚乳培養75

思考題76

第7章花藥和花粉培養77

71花藥培養77

711材料的選擇77

712預處理78

713培養基78

714培養方式80

715培養條件80

716花粉植株的倍性及染色體加倍81

72花粉培養82

721材料的選擇和預處理82

722花粉的分離83

723花粉培養方法83

73花藥和花粉培養中的白化苗問題84

731白化苗產生的原因84

732植物白化苗研究存在的問題與

展望87

74操作實例88

741煙草花藥培養88

742煙草花粉培養88

思考題88

第8章植物的細胞培養及次生物質

生產89

81植物的單細胞培養89

811單細胞的分離89

812單細胞培養技術90

82植物細胞的懸浮培養93

821細胞懸浮培養的一般過程93

822懸浮培養工藝94

83植物細胞的大規模培養和次生物質

生產95

831細胞株的篩選97

832培養基的選擇97

833培養條件的選擇99

834生物反應器的選擇99

835產物的分離純化104

836操作實例：伊貝母細胞培養及

生物鹼含量測定105

思考題106

第9章原生質體培養和體細胞雜交107

91原生質體的分離與純化107

911原生質體的分離107

912原生質體的純化與活力測定109

92原生質體培養111

921培養基111

922培養方法111

923原生質體的再生培養113

924操作實例：三葉半夏的原生質體

培養114

93體細胞雜交115

931原生質體的選擇115

932原生質體誘導融合的方法116

933雜種細胞的選擇118

934體細胞雜種的鑒定119

935體細胞雜種的遺傳特徵120

思考題120

第10章植物種質的超低溫保存121

101抑制外植體生長的離體保存方法121

1011降低溫度122

1012降低環境中的氧含量122

1013使用生長抑制物質122

1014其他方法122

102離體植物材料的超低溫冰凍保存技術123

1021超低溫保存原理及基本程序123

1022材料的選擇123

1023材料的預處理123

1024冰凍保護劑預處理124

1025降溫冰凍操作124

1026化凍操作127

1027化凍材料的活力檢測128

1028超低溫種質保存實例128

思考題129第3篇動物細胞工程

第11章動物細胞培養所需的基本

條件130

111動物細胞培養基的組成和製備130

1111水和平衡鹽溶液130

1112天然培養基131

1113合成培養基133

1114無血清培養基135

112影響動物細胞培養的環境因素138

1121溫度138

1122pH138

1123氧氣和二氧化碳139

1124滲透壓139

思考題139

第12章動物細胞培養技術140

121原代培養140

1211取材140

1212分離細胞141

1213原代培養常用方法145

122傳代培養146

1221貼壁生長細胞傳代146

1222半懸浮生長細胞傳代146

1223懸浮生長細胞傳代146

123細胞系與細胞克隆147

1231細胞系(株)的建立147

1232細胞克隆技術147

1233克隆的分離149

124動物細胞的大規模離體培養技術150

1241氣升式培養系統151

1242微載體培養系統151

1243中空纖維培養系統152

1244微囊培養系統154

1245旋轉式細胞培養系統154

1246大規模動物細胞培養技術的應用和存在的問題155

125動物細胞的超低溫保存技術155

1251冷凍保護劑156

1252常規冷凍方法156

1253玻璃化凍存方法156

思考題157

第13章動物細胞融合和雜交瘤技術158

131動物細胞融合技術158

1311誘導細胞融合的方法158

1312融合細胞的篩選161

1313雜交細胞的遺傳表型162

132雜交瘤技術與單克隆抗體生產162

1321親本選擇163

1322細胞融合164

1323雜交細胞的篩選164

1324雜交瘤細胞的克隆培養165

1325單克隆抗體的生產165

思考題166

第14章細胞重組及動物克隆技術167

141細胞重組技術168

1411細胞重組的方式168

1412細胞重組原料的製備168

142細胞核移植和動物克隆技術170

1421核移植技術的一般操作程序170

1422胚胎細胞核移植172

思考題178

第15章幹細胞技術179

151幹細胞概述179

1511幹細胞研究的發展179

1512幹細胞的定義和分類180

1513幹細胞的生物學特點181

152細胞分離純化常用技術184

1521利用細胞體積和密度進行分離純化184

1522選擇性細胞凝集185

1523基於不同黏附特性的細胞分離方法185

1524利用細胞表面標誌分離純化細胞的方法185

153胚胎幹細胞187

1531胚胎幹細胞的分離187

1532胚胎幹細胞的培養187

1533胚胎幹細胞的鑒定189

1534胚胎幹細胞的誘導分化189

1535胚胎幹細胞的應用前景及存在問題190

154成體幹細胞192

1541間充質幹細胞193

1542造血幹細胞194

1543成體幹細胞的應用前景和存在問題197

1551iPS細胞的建立200

1552iPS技術的改進201

1553iPS細胞的應用前景和尚待

解決的問題204

思考題206

附錄207

附錄1植物組織細胞培養基207

附錄2一些植物生長物質及其主要

性質213

附錄3動物細胞培養基214

附錄4無血清培養液的添加成分219

附錄5一些常用有機物的性質220

附錄51一些碳水化合物及其主要

性質220

附錄52一些維生素及其主要性質221

附錄53一些氨基酸及其主要性質221

參考文獻223