圖位克隆

圖位克隆，亦稱定位克隆。是指基於目標基因緊密連鎖的分子標記在染色體上的位置來逐步確定和分離目標基因的技術方法。用該方法分離基因是根據目的基因在染色體上的位置進行的，無需預先知道基因的DNA順序，也無需預先知道其表達產物的有關信息，但應有以下兩方面的基本情況：一是有一個根據目的基因的有無建立起來的遺傳分離群體，如F2、DH、BC、RI等。二是開展以下幾項工作：①首先找到與目標基因緊密連鎖的分子標記。②用遺傳作圖和物理作圖將目標基因定位在染色體的特定位置。③構建含有大插入片段的基因組文庫(BAC庫或YAC庫）。④以與目標基因連鎖的分子標記為探針篩選基因組文庫。⑤用陽性克隆構建目的基因區域的跨疊群。⑥通過染色體步行、登陸或跳躍獲得含有目標基因的大片段克隆。⑦通過亞克隆獲得含有目的基因的小片段克隆。⑧通過遺傳轉化和功能互補驗證最終確定目標基因的鹼基序列。