免疫酶技術
免疫酶技術
免疫酶技術(immunoenzymatic technique)也叫酶免疫測定，是通過酶標記抗體或抗原來檢測抗原或抗體的方法，其應用範圍極廣。顯示方法是用酶的特殊底物來處理反應后的標本，通過酶催化底物的顯色反應來測定抗原或抗體的存在，以酶標作定量或定性分析。標記酶有辣根過氧化物酶(HRP) 和鹼性磷酸酶等，它們與抗原或抗體結合后活性不受影響。底物一般是鄰苯二胺和對硝基苯磷酸酯。它具有敏感性高、特異性強，既可定性又可定量的特點。
免疫酶技術是指在一定的生物反應器內，利用酶的催化作用，進行物質轉化的技術。其應用範圍已遍及工業、醫藥、農業、化學分析、環境保護、能源開發和生命科學理論研究等各個方面。
免疫酶技術是將抗原抗體反應的特異性與酶的高效催化作用有機結合的一種方法。它以酶作為標記物，與抗體或抗原聯結，與相應的抗原或抗體作用后，通過底物的顏色反應作抗原抗體的定性和定量，亦可用於組織中抗原或抗體的定位研究，即酶免疫組織化學技術。
目前應用最多的免疫酶技術是酶聯免疫吸附實驗（ELISA），它是使抗原或抗體吸附於固相載體，使隨後進行的抗原抗體反應均在載體表面進行，從而簡化了分離步驟，提高了靈敏度，即可檢測抗原，也可檢測抗體。實驗方法包括間接法、夾心法及競爭法。
為了檢測抗原可用夾心法。將特異性抗體吸附在固相載體（聚苯乙烯製成的小管、小盤或小孔）上，然後加被測溶液，倘樣品中有相應抗原，則與抗體在載體表面形成複合物。洗滌后加入酶標記的特異性抗體，後者通過抗原也結合到載體的表面。洗去過剩的標記抗體，加入酶的底物，在一定時間內經酶催化產生的有色產物的量與溶液中抗原含量成正比，可用肉眼觀察或分光光度計測定。
為了檢測抗體可用間接法。使抗原吸附於載體上，然後加入被測血清，如有抗體，則與抗原在載體上形成複合物。洗滌后加酶標記的抗球蛋白（抗抗體）與之反應。洗滌后加底物顯色，有色產物的量與抗體的量成正比。
常用的酶有辣根過氧化物酶（HRP）和鹼性磷酸酶（AP），相應的底物分別是鄰苯二胺（OPD）和對硝基苯磷酸鹽，前者呈色反應為棕黃色，後者為藍色。可用目測定性，也可用酶標儀測定光密度（OD）值以反映抗原含量。
ACA（抗心磷脂抗體）主要通過抑制血管內皮細胞合成PGI2，干擾血栓調節素、纖溶酶原激活劑和蛋白質C系統的活性，抑制抗凝血酶III的活化等而致凝血前高凝狀態，與複發性動靜脈血栓形成、反覆自然流產及血小板減少症關係密切。
其主要程序為用純心磷脂的無水乙醇溶液包被聚苯乙烯板，封閉後分別於標本孔和對照孔中加入一定稀釋度的被檢血清及陽性與陰性對照血清，之後加入酶標二抗和酶底物，終止反應后肉眼觀察結果或測吸光度（A）值。
具體步驟如下：
預步驟：先用一定濃度的心磷脂溶液包被聚苯乙烯板的小孔，4℃冰箱過夜，次日取出甩盡液體備用。
（1）用微量移液器分別加待檢血清、陽性對照、陰性對照各100μl於1、2、3孔中，370C水浴箱溫育30min。
（2）用PBS液洗板3次，每次3min，甩干。
（3）每孔加入酶結合物2滴，370C水浴箱溫育30min。
（4）用PBS液洗板3次，每次3min，甩干
（5）每孔分別加入顯色A液、B液各1滴，混勻。370C水浴箱溫育5-10min。
（6）取出肉眼觀察結果。如待檢血清溶液與陽性對照一致均為藍色，表明待檢血清為ACA 血清。