dna探針技術
對特異性DNA序列探查的技術
DNA探針技術又稱分子雜交技術,是利用DNA分子的變性、復性以及鹼基互補配對的高度精確性,對某一特異性DNA序列進行探查的新技術。
DNA探針利用同位素、生物素等標記的特定DNA片斷,該片斷可大至寄生蟲基因組DNA,小至20個鹼基。當DNA探針與待測的非標記單鏈DNA(或RNA)按鹼基順序互補結合時,以氫健將2條單鏈連接而形成標記DNA-DNA(或標記DNA-RNA)的雙鏈雜交分子。將未配對結合的核苷酸溶解後用檢測系統(放射自顯影或酶檢測等)檢測雜交反應結果。由於DNA分子鹼基互補的精確性,單鏈DNA探針僅與樣品中變性處理的DNA單鏈出現配對雜交,由此決定了探針的特異性;用放射性同位素(如32P)或生物素標記探針,使雜交試驗同時具有高度的敏感性。
現已獲得DNA探針數量很多,有細菌、病毒、原蟲、真菌、動物和人類細胞DNA探針。這類探針多為某一基因的全部或部分序列,或某一非編碼序列。這些DNA探針的獲得有賴於分子克隆技術的發展和應用。所以DNA探針屬於基因工程重要技術之一。比如基因工程應用於環境監測,可以用DNA探針檢測飲用水病毒的含量。具體方法:用一個特定的DNA片段製成探針,與被測的病毒DNA雜交,從而把病毒檢測出來。與傳統方法相比具有快速、靈敏的特點。傳統的檢測一次,需幾天或幾個星期的時間,精確度不高,而用DNA探針只需一天。據報道,能從1t水中檢測出 10個病毒來,精確度大大提高。