對流免疫電泳

免疫電泳技術是將瓊脂內電泳和凝膠內沉澱反應相結合的一種常用的免疫學方法，包括免疫電泳、對流免疫電泳和火箭電泳等方法。

在pH值8.6的瓊脂凝膠中，抗體球蛋白只帶有微弱的負電荷，而且它分子又較大，所以泳動慢，受電滲作用的影響也大，往往不能抵抗電滲作用，故在電泳時，反而向負極倒退。而一般抗原蛋白質常帶較強的負電荷，分子又較小，所以泳動快，雖然由於電滲作用泳動速度減慢，但仍能向正極泳動。如將抗原置陰極，抗體置陽極，電泳時，兩種成分相對泳動，一定時間后抗原和抗體將在兩孔之間相遇，並在比例適當的地方形成肉眼可見的沉澱線。這樣由於電泳的作用，不僅幫助抗體定向移動，因而加速了反應的出現，而且也限制了瓊脂擴散時，抗原抗體向四周自由擴散的傾向，因而也提高了敏感性，本法比瓊脂擴散法的靈敏度要高10～16倍，而且反應時間短，可用於各種蛋白的定性和半定量測定。

1．制瓊脂板 以pH8.6離子強度0.05巴比妥緩衝液配成1%～1.5%瓊脂凝膠板，厚度2mm～3mm。

2．打孔 瓊脂冷卻后，按圖打孔，打成對的小孔數列，孔徑0.3cm～0.6cm，孔距0.4cm～1.0cm。挑去孔內瓊脂，封底。

3．加樣 一對孔中，一孔加已知（或待測）抗原，另一孔加待測（或已知）抗體。

4．電泳 將抗原孔置於負極端。電壓2.5V/cm～6V/cm，或電流強度3mA/cm～5mA/cm，電泳時間30min～90min。

斷電后，將玻板置於燈光下，襯以黑色背景觀察。陽性者則在抗原抗體孔之間形成一條清楚緻密的白色沉澱線。如沉澱線不清晰，可把瓊脂板放在濕盒中37℃數小時或置電泳槽過夜再觀察。

1．抗原抗體濃度的比例 當抗原抗體比例不適合時，均不能出現明顯可見的沉澱線。所以除了應用高效價的血清外，每份待測樣品均可做幾個不同的稀釋度來進行檢查。

2．特異性對照鑒定 為了排除假陽性反應，則在待檢抗原孔的鄰近並列一陽性抗原孔，若待檢樣品中的抗原與抗體所形成的沉澱線和陽性抗原抗體沉澱線完全融合時，則待檢樣品中所含的抗原為特異性抗原。

3．適當的電滲作用在對流免疫電泳中是必要的。當瓊脂質量差時，電滲作用太大，而使血清中的其它蛋白成分也泳向負極，造成非特異性反應。在某些情況，瓊脂糖由於缺乏電滲作用而不能用於對流免疫電泳。

4．當抗原抗體在同一介質中帶同樣電荷或遷徙相近時，則電泳時兩者向著一個方向泳動。故不能用對流免疫電泳來檢查。