CTAB法

CTAB法

CTAB是一種陽離子去污劑,具有從低離子強度溶液中沉澱核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB與蛋白質和多聚糖形成複合物，但不會沉澱核酸。再通過有機溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類等雜質后，加入乙醇沉澱，即可使核酸分離出來。

目錄

1全稱 2用途 3步驟

全稱

CTAB法的全稱是十六烷基三甲基溴化銨法（cetyltrimethylammonium Ammonium Bromide）。

用途

主要用於提取生物DNA

步驟

（1）2%CTAB抽提緩衝液在65℃水浴中預熱。

（2）取少量實驗材料（約300mg）置於研缽中，用液氮磨至粉狀；

（3）加入700ul的2%CTAB抽提緩衝液，輕輕攪動；

（4）將磨碎液分倒入1.5ml的滅菌離心管中，磨碎液的高度約佔管的三分之二；

（5）置於65℃的水浴槽或恆溫箱中，每隔10min輕輕搖動，30~60min后取出；

（6）冷卻2min后，加入氯仿-異戊醇（24：1）至滿管，劇烈振蕩2~3min（若提取的是總基因組，則不能劇烈震蕩。），使兩者混合均勻；

（7）放入離心機中10000rpm離心10min，與此同時，將600ul的異丙醇加入另一新的滅菌離心管中；

（8）10000rpm離心1min后，移液器輕輕地吸取上清液，轉入含有異丙醇的離心管內，將離心管慢慢上下搖動30sec，使異丙醇與水層充分混合至能見到DNA絮狀物；

（9）10000rpm離心1min后，立即倒掉液體，注意勿將白色DNA沉澱倒出，將離心管倒立於鋪開的紙巾上；

（10）60sec后，直立離心管，加入720ul的75%乙醇及80ul5M的醋酸鈉，輕輕轉動，用手指彈管尖，使沉澱與管底的DNA塊狀物浮遊於液體中；

（11）放置30min，使DNA塊狀物的不純物溶解；

（12）10000rpm離心1min后，倒掉液體，再加入800ul75%的乙醇，將DNA再洗30min；

（13）10000rpm離心30sec后，立即倒掉液體，將離心管倒立於鋪開的紙巾上；數分鐘后，直立離心管，乾燥DNA（自然風乾或用風筒吹乾）；

（14）加入50ul0.5×TE(含RNase)緩衝液，使DNA溶解，置於37℃恆溫箱約15h，使RNA消解；

以上為通用CTAB法，實驗時可根據不同材料加以改進，以獲得最佳實驗結果.

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