酶試劑

早期臨床實驗室測酶活性時常使用比色法，先讓酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時間，然後停止酶反應，加入試劑進行化學反應呈色測出底物和產物的變化。由於比色法靈敏度較低，或由於手工操作不易控制好，常定在30分鐘左右。歷史上這類方法常被命名為“終點法”、“二點法”、“固定時間法”和“取樣法”。大多數文獻使用“固定時間法”。此命名指出了用這類方法測酶活性濃度，必須保證酶和底物在所選定的溫度下作用時間要很精確，否則將引起較大誤差。但“取樣法”的命名更具有特徵性。因它指出此類方法和下面將提到的另一類連續監測法相比較，最基本一點的是此類方法停止反應后才測底物或物的變化。很難進行連續監測，而另一類方法則不需停止酶反應，就可測定反應物的變化，很容易觀察到反應的整個過程。后一類方法開始於50年代，Warburg首先用分光光度計。在340nm處直接監測到反應物NADH的動態變化過程。由於不停止酶反應，不需添加其它呈色試劑。

在酶作用下，底物[S]濃度不斷下降，隨之有相應產物[P]產生。不少酶在反應一開始的階段，由於各種因素影響，反應速度較慢，稱為延滯期，隨後在過量濃度的底物存在條件下，酶反應以恆定的速度進行，不受底物濃度變化的影響，這段反應稱為線性反應期或零級反應期。隨時間延長，反應速度除與酶量有關，還與底物濃度有關。即v＝k(a－x)，式中a為原來底物濃度，x為消耗的底物濃度，如反應物濃度項上指數為1，稱為一級反應，假如反應速率受二種或二種以上物質濃度的影響，則各個反應物濃度項上指數總和作為反應級數，可以分別為一級、二級或多級反應，總的將這段反應時期稱為非線性反應期。

比色法、二點法、終點法、酶反應、延滯期

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