TE緩衝液

用於儲存DNA和RNA的溶液

TE緩衝液是由TrisEDTA配製而成,主要用於溶解核酸,能穩定儲存DNARNA。TE緩衝液是一種能在加入少量酸或鹼時抵抗pH改變的溶液。

PH緩衝系統對維持生物的正常pH值,正常生理環境起重要作用。多數細胞僅能在很窄的pH範圍內進行活動,而且需要有緩衝體系來抵抗在代謝過程中出現的pH變化。在生物體中有三種主要的pH緩衝體系,它們是蛋白質、重碳酸鹽緩衝體系和磷酸鹽緩衝體系。每種緩衝體系所佔的分量在各類細胞和器官中是不同的。

介紹


內容

TE緩衝溶液(Tris-EDTA buffer solution)
在生化研究工作中,常常要用到緩衝溶液來維持實驗體系的酸鹼度。研究工作的溶液體系pH值的變化往往直接影響到我們工作的成效。如果提取酶實驗體系的pH值變化或變化過大,會使酶活性下降甚至完全失活。所以我們要學會配製緩衝溶液。
由弱酸及其鹽組合一起使具有緩衝作用。生化實驗室常常用的緩衝系主要有磷酸檸檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tris(三羥甲基氨基甲烷)等系統,在生化實驗或研究工作中要慎重地選擇緩衝體系,因為有時影響實驗結果的因素並不是緩衝液的pH值,而是緩衝液中的某種離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和三羥甲基甲烷等緩衝劑都可能產生不需要的反應。
硼酸鹽:硼酸鹽與許多化合物形成復鹽、如蔗糖。
檸檬酸鹽:檸檬酸鹽離子容易與鈣結合,所以存在有鈣離子的情況下不能使用。
磷酸鹽:在有些實驗,它是酶的抑止劑或甚至是一個代謝物,重金屬易以磷酸鹽的形式從溶液中沉澱出來。而且它在pH7.5以上時緩衝能力很小。
三羥甲基氨基甲烷:它可以和重金屬一起作用,但在有些系統中也起抑止的作用。其主要缺點時溫度效應。這點往往被忽視,在室溫pH是7.8的Tris一緩衝液,在4℃時是8.4,在37℃時是7.4,因此,4℃配製的緩衝液拿到37℃測量時,其氫離子濃度就增加了10倍。而且它在pH7.5以下,緩衝能力差。

配製

TE Buffer
組成濃度:10mMTris-HCl1mM EDTA PH=8.0
配製量:500ml
配製方法:量取下列溶液於500ml燒杯中
1M Tris-HCl Buffer PH=8.0 5ml
0.5M EDTA PH=8.0 1ml
向燒杯中加入約400mldd HO均勻混合;將溶液定容到500ml后,高溫高壓滅菌;室溫保存.

作用及用途


作用

TE緩衝液是弱鹼性,對DNA的鹼基有保護性,(DNA在TE中的穩定性較好,不易被破壞其完整性或產生開環及斷裂),包括提取好的DNA也要放在TE緩衝液中保存.

用途

TE緩衝液是Tris +EDTA緩衝液,這種緩衝液我們一般用作溶解劑或保持劑,主要是調控PH,TAE是一種電泳緩衝液,主要用於DNA分子的電泳。 TE組成濃度:10mM Tris-HCl 1mM EDTA PH=8.0 配製量:500ml 配製方法:量取下列溶液於500ml燒杯中 1M Tris-HCl Buffer PH=8.0 5ml 0.5M EDTA PH=8.0 1ml 向燒杯中加入約400mldd H2O均勻混合;將溶液定容到500ml后,高溫高壓滅菌;室溫保存.
TAE是使用最廣泛的緩衝系統。其特點是超螺旋在其中電泳時更符合實際相對分子質量TBE中電泳時測出的相對分子質量會大於實際分子質量),且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率較其他兩種緩衝液快約10%,電泳大於13kb的片段時用TAE緩衝液將取得更好的分離效果,此外,回收DNA片段時也易用TAE緩衝系統進行電泳。TAE的缺點是緩衝容量小,長時間電泳(如過夜)不可選用,除非有循環裝置使兩極的緩衝液得到交換。 50×TAE Buffer 配製方法: 1. 稱量Tris 242g,Na2EDTA.2H2O 37.2g 於1L燒杯中; 2.向燒杯中加入約800ml去離子水,充分攪拌均勻; 3加入57.1ml的冰乙酸,充分溶解; 4.加去離子水定容至1L后,室溫保存。