菌落雜交

菌落雜交

菌落雜交,是因為生長在培養基平板上的菌落或噬菌斑按照其原來的位置不變地轉移到濾膜上,並在原位發生溶菌< DNA 變性和雜交作用。這種方法對於從成千上萬的菌落或噬菌斑中鑒定出含有重組體分子的菌落或噬菌斑具有特殊的實用價值。

菌落雜交Colon hybridization :使用原位雜交來確定攜帶一個特定同源序列的插入DNA片段載體的技術。

基本介紹


即菌落雜交法colony hybridization method ,以質粒為載體進行DNA克隆繁殖所用的方法,即從多數寄主菌的菌落中,將含特定的鹼基排列順序的DNA,通過與其鹼基排列順序互補的RNA或DNA雜交而進行檢出和選擇的方法。一般是使在瓊膠培養基上形成含有質粒的菌落後,在其上面壓附一層硝酸纖維素薄膜,將菌落移於薄膜上。用鹼處理同時引起溶菌和DNA變性后,在薄膜上各個群落的位置上分別將變性的DNA固定起來,然後與用放射性同位素標記的特定的RNA或DNA片斷雜交,再用放射自顯影法來鑒別含有所希望的DNA排列順序的寄主菌的菌落,最後從原來的瓊膠培養基上的菌落中選出其相應的材料。