菌落

菌落，亦稱集落。一定種的單個菌體或孢子在一定的固體培養基上生長繁殖后形成的肉眼可見的微生物聚集體。

在培養基表面生長的菌落，叫表面菌落；在表面下生長的菌落，叫埋藏或深層菌落。不同的微生物形成的菌落有不同的特徵，是鑒定菌種的重要標誌。

各種微生物在一定條件下形成的菌落特徵，如大小、形狀、邊緣、表面、質地、顏色等，具有一定的穩定性，是衡量菌種純度、辨認和鑒定菌種的重要依據。菌落特徵與微生物的菌體形態結構特徵密切相關。例如，細菌、酵母菌不形成菌絲，其菌落僅生長在固體培養基表面，與培養基結合不緊密，可用接種工具將其全部挑起；而放線菌、黴菌的菌體大多分化為營養菌絲與繁殖菌絲，營養菌絲深入培養基中吸取營養，具有與培養基結合較緊，不易挑起等特徵。

根據標準要求或對污染情況的估計，選擇2~3個適宜稀釋度，分別在制10倍遞增稀釋的同時，以吸取該稀釋度的吸管移取1ml稀釋液於滅菌平皿中，每個稀釋度做兩個平皿。將涼至46℃營養瓊脂培養基注入平皿約15ml，並轉動平皿，混合均勻。同時將營養瓊脂培養基傾入加有1ml稀釋液（不含樣品）的滅菌平皿內作空白對照。待瓊脂凝固后，翻轉平板，置36±1℃溫箱內培養48±2h，取出計算平板內菌落數目，乘以稀釋倍數，即得每克（每毫升）樣品所含菌落總數。

1．傾注用培養基應在46℃水浴內保溫，溫度過高會影響細菌生長，過低瓊脂易於凝因而不能與菌液充分混勻。如無水浴，應以皮膚感受較熱而不燙為宜。傾注培養基的量規定不一，從12~20ml不等，一般以15ml較為適宜，平板過厚可影響觀察，太薄又易於乾裂。傾注時，培基底部如有沉澱物，應將底部棄去，以免與菌落混淆而影響計數觀察。

2．為使菌落能在平板上均勻分佈，檢液加入平皿后，應儘快傾注培養基並旋轉混勻，可正反兩個方向旋轉，檢樣從開始稀釋到傾注最後一個平皿所用時間不宜超過20min，以防止細菌有所死亡或繁殖。

3．培養溫度一般為37℃（水產品的培養溫度，由於其生活環境水溫較低，故多採用30℃）。培養時間一般為48h，有些方法只要求24h的培養即可計數。培養箱應保持一定的濕度，瓊脂平板培養48h后，培養基失重不應超過15%。

4．為避免食品中的微小顆粒或培基中的雜質與細菌菌落髮生混淆，不易分辨，可同時作一稀釋液與瓊脂培基混合的平板，不經培養，而於4℃環境中放置，以便計數時作對照觀察。在某些場合，為了防止食品顆粒與菌落混淆不清，可在營養瓊脂中加入氯化三苯四氮唑（TTC），培養后菌落呈紅色，易於分別。

1. 操作要快而准，包括材料、加樣、倒培養基。

2. 吸液體時液體不能進入吸頭。

3. 樣品稀釋時一定要混勻。

4. 倒培養基前，瓶口要過火焰。

5. 一定要有空白對照。

6. 培養基溫度控制，培養基薄厚。

7. 檢測時一定要使平皿完全暴露於空氣中。

菌落形態包括菌落的大小、形狀、邊緣、光澤、質地、顏色和透明程度等。每一種細菌在一定條件下形成固定的菌落特徵。不同種或同種在不同的培養條件下，菌落特徵是不同的。這些特徵對菌種識別、鑒定有一定意義。

細胞形態是菌落形態的基礎，菌落形態是細胞形態在群體集聚時的反映。細菌是原核微生物，故形成的菌落也小；細菌個體之間充滿著水分，所以整個菌落顯得濕潤，易被接種環挑起；球菌形成隆起的菌落；有鞭毛細菌常形成邊緣不規則的菌落；具有莢膜的菌落表面較透明，邊緣光滑整齊；有芽孢 的菌落表面乾燥皺褶；有些能產生色素的細菌菌落還顯出鮮艷的顏色。

大腸桿菌在普通瓊脂培養基上面都是一樣的，圓形邊緣整齊，表面光滑，半透明，小凸起；典型的大腸桿菌在伊紅美藍瓊脂平板上的特徵為：深紫黑色、光滑、濕潤、帶有金屬光澤的圓形菌落。