傳代細胞系

二倍體細胞在傳代繁殖過程中，有些細胞發生改變，不僅形態發生變化，且生長更快，能以少量的細胞起始培養。由一個這樣的細胞得到的細胞克隆，與它起源的細胞株大不相同，它能無限期地生存，這樣的細胞克隆稱為傳代。

1、取材：材料主要來源於外科手術或活檢瘤組織，取材時避免用壞死組織，要挑選瘤細胞集中和活力較好的部位，瘤性轉移淋巴結或胸腹水是較好的培養材料。取材后儘快培養，因故不能立即培養者，可凍存。其培養方法及凍存方法同前述正常組織。

2、成纖維細胞排除：在腫瘤組織中常混雜有一些成纖維細胞，培養時能與瘤細胞同時生長，並常壓過癌細胞，導致癌細胞生長受阻以至消失，應仔細排除。排除方法常有：機械刮除法、反覆貼壁法、消化排除法、膠原酶消化法等。

3、提高腫瘤細胞培養存活率和生長率

根據實驗經驗，腫瘤細胞在體外不易培養，建立能傳代的腫瘤細胞系更為困難。一般當腫瘤組成或細胞被原代培養后，要經過對新環境的適應才能生長，因此不能局限於一般培養法，須採用一些特殊措施。如：用適宜底物，鼠尾膠原底層及飼細胞底層等。用細胞生長因子，根據細胞種類不同選用不同的促細胞生長因子，如胰島素、氫化可的松，雌激素等。也可以考慮動物媒介培養。

由於哺乳動物細胞傳代細胞系（continuous cell lines，CCL）對重組蛋白質的翻譯后加工、修飾比大腸桿菌、酵母和昆蟲細胞具有不可替代的優點，因此，採用哺乳動物細胞CCL作為宿主細胞建立細胞庫也就成為重組治療用生物製品的研發和申報熱點。明確的宿主細胞來源和歷史可以為我們對後續建庫細胞的檢定提供更有針對性的策略。因此，要求培養用CCL的來源要明確。

國內所用的CCL常來源於美國典型菌種保藏庫（American Type Culture Collection ，ATCC），來源和歷史背景比較明確，只需要註明這些細胞基質的ATCC編號及相關背景資料，提供有關的證明性文件，說明該細胞購於ATCC並可用於商業化生產 醫學教 育網收集整理。如果申辦人從天然來源中分離了細胞，建立了細胞系，就應該介紹這個細胞系的來源、分離方法、體外培養過程以及細胞系建立程序（如物理、化學、生物學方法的應用或核酸序列）。對於動物細胞系應該提供：種類、品系、飼養條件、組織或器官來源、地區來源、年齡、性別和一般生理狀況，是否含有內源或外源因子的檢測結果，定量培養的時間等。

確保生物製品安全、有效性所需的細胞背景信息

●細胞的來源實驗室或培養物保藏單位[如ATCC]相關的科學研究文獻(理想的信息來自細胞來源的原始實驗室)

●細胞培養歷史細胞體外培養程序細胞建系的過程（如：使用的化學或生物學步驟或引入的核苷酸序列）基因操作內容

●所有的細胞鑒定、特性、外源性和內源性因子的檢定結果

●對傳代細胞系，還要提供：細胞倍增的次數或轉種的次數(轉種間隔時間或稀釋比例)

●關於細胞的培養，需提供：可能暴露於感染性物質的操作步驟培養基的組分或添加物

●暴露於動物源或人源性原材料的情況(如：血清、酶類和細胞因子)表2曾經或常用於蛋白表達的哺乳動物細胞繫上述表中的信息，尤其是表2，由筆者根據掌握的現有知識總結。對申報資料要求的解讀系個人觀點，有不恰當之處，還希望多多交流，共同進步。