丙二醛

無色針狀晶體，熔點 72～74℃，一般含兩個結晶水，60℃下真空乾燥可得無水物，易潮解，純的丙二醛在中性條件下穩定，但在酸性條件下不穩定。由乙醛和甲酸乙酯在鹼作用下縮合而得，可在高真空下升華精製，主要用於醫藥中間體、感光色素的原料。與蛋白質不相容，有潛在的致癌性。生物體內，自由基作用於脂質發生過氧化反應，氧化終產物為丙二醛，會引起蛋白質、核酸等生命大分子的交聯聚合，且具有細胞毒性。脂質氧化終產物丙二醛(MDA)在體外影響線粒體呼吸鏈複合物及線粒體內關鍵酶活性。

採用不同濃度MDA體外干預大鼠肝線粒體，氧電極法檢測線粒體呼吸控制率（RCR）、磷氧比（P/O），測定呼吸鏈複合物及α-酮戊二酸脫氫酶、丙酮酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶活性。結果：線粒體經MDA作用后，以蘋果酸/谷氨酸或琥珀酸作底物，線粒體兩條呼吸途徑對MDA呈現不同的耐受力，前者在MDA100μmol/L時RCR顯著降低（P<0.05），400μmol/L時P/O降低（P<0.05）；後者MDA濃度達到400和800μmol/L時，線粒體P/O及RCR值顯著降低（P<0.05）。丙酮酸脫氫酶及α-酮戊二酸脫氫酶分別在50μmol/L和100μmol/L時活性下降（P<0.05），而MDA濃度達到1mmol/L時，蘋果酸脫氫酶活性降低（P<0.05）。呼吸鏈複合物Ⅰ、Ⅱ分別在MDA400和800μmol/L時最大反應速度（Vm）降低（P<0.05），但MDA（0～3.2 mmol/L）對呼吸鏈複合物Ⅲ、Ⅳ的Vm及米氏常數（Km）沒有影響。結論：MDA對線粒體呼吸鏈及α-酮戊二酸脫氫酶、丙酮酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶存在不同程度的損傷作用，不同酶對MDA損傷的敏感程度有所差異，本研究中相關酶受MDA損傷的次序可能是：丙酮酸脫氫酶、α-酮戊二酸脫氫酶、呼吸鏈複合物Ⅰ、呼吸鏈複合物Ⅱ、蘋果酸脫氫酶、呼吸鏈複合物Ⅲ、Ⅳ.

一：原理

丙二醛（MDA）是常用的膜脂過氧化指標，在酸性和高溫度條件下，可以與硫代巴比妥酸（TBA）反應生成紅棕色的三甲川（3，5，5-三甲基惡唑-2，4-二酮），其最大吸收波長在532nm。但是測定植物組織中MDA時受多種物質的干擾，其中最主要的是可溶性糖，糖與TBA顯色反應產物的最大吸收波長在450nm，但532nm處也有吸收。植物遭受乾旱、高溫、低溫等逆境脅迫時可溶性糖增加，因此測定植物組織中MDA—TBA反應物質含量時一定要排除可溶性糖的干擾。低濃度的鐵離子能夠顯著增加TBA與蔗糖或MDA顯色反應物在532、450nm處的消光度值，所以在蔗糖、MDA與TBA顯色反應中需一定量的鐵離子，通常植物組織中鐵離子的含量為每克千重100—300ug/g，根據植物樣品量和提取液的體積，加入Fe3+的終濃度為0.5umol/L。

二：試劑

1：質量分數為10%三氯乙酸（TCA）；

2：質量分數0.6%硫代巴比妥酸：先加少量的氫氧化鈉（1mol·L-1）溶解，再用10%的三氯乙酸定容；

三：方法

1：MDA的提取 稱取剪碎的試材1g，加入2mll0%TCA和少量石英砂，研磨至勻漿，再加8mlTCA研磨，勻漿在4000r/min離心10min，上清液為樣品提取液。

2：顯色反應和測定 吸取離心的上清液2ml（對照加2ml蒸餾水），加入2ml0.6%TBA溶液，混勻物於沸水浴上反應15min，迅速冷卻后再離心。取上清液測定532、600和450nm波長下的消光度。

四：結果

C1=11.71D450

C2={6.45(D532 - D600) - 0.56D450}NW-1

C1——可溶性糖的濃度（mmol/L）

C2——MDA的濃度（·umol/L）

D450、0532、D600分別代表450、532和600nm波長下的消光度值。

N：提取液總體積（ml）

W：植物組織鮮重