丙二醛

呈無色針形晶體狀的化合物

丙二醛,是一種有機化合物,分子式為C3H4O2。

2017年10月27日,世界衛生組織國際癌症研究機構公布的致癌物清單初步整理參考,丙二醛在3類致癌物清單中。

形態特徵


丙二醛測試盒
丙二醛測試盒
無色針狀晶體,熔點 72~74℃,一般含兩個結晶水,60℃下真空乾燥可得無水物,易潮解,純的丙二醛在中性條件下穩定,但在酸性條件下不穩定。由乙醛和甲酸乙酯在鹼作用下縮合而得,可在高真空下升華精製,主要用於醫藥中間體、感光色素的原料。與蛋白質不相容,有潛在的致癌性。生物體內,自由基作用於脂質發生過氧化反應,氧化終產物為丙二醛,會引起蛋白質、核酸等生命大分子的交聯聚合,且具有細胞毒性。脂質氧化終產物丙二醛(MDA)在體外影響線粒體呼吸鏈複合物及線粒體內關鍵酶活性。

研究方法


採用不同濃度MDA體外干預大鼠肝線粒體,氧電極法檢測線粒體呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O),測定呼吸鏈複合物及α-酮戊二酸脫氫酶、丙酮酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶活性。結果:線粒體經MDA作用后,以蘋果酸/谷氨酸或琥珀酸作底物,線粒體兩條呼吸途徑對MDA呈現不同的耐受力,前者在MDA100μmol/L時RCR顯著降低(P<0.05),400μmol/L時P/O降低(P<0.05);後者MDA濃度達到400和800μmol/L時,線粒體P/O及RCR值顯著降低(P<0.05)。丙酮酸脫氫酶及α-酮戊二酸脫氫酶分別在50μmol/L和100μmol/L時活性下降(P<0.05),而MDA濃度達到1mmol/L時,蘋果酸脫氫酶活性降低(P<0.05)。呼吸鏈複合物Ⅰ、Ⅱ分別在MDA400和800μmol/L時最大反應速度(Vm)降低(P<0.05),但MDA(0~3.2 mmol/L)對呼吸鏈複合物Ⅲ、Ⅳ的Vm及米氏常數(Km)沒有影響。結論:MDA對線粒體呼吸鏈及α-酮戊二酸脫氫酶、丙酮酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶存在不同程度的損傷作用,不同酶對MDA損傷的敏感程度有所差異,本研究中相關酶受MDA損傷的次序可能是:丙酮酸脫氫酶、α-酮戊二酸脫氫酶、呼吸鏈複合物Ⅰ、呼吸鏈複合物Ⅱ、蘋果酸脫氫酶、呼吸鏈複合物Ⅲ、Ⅳ.

測量方法


一:原理
丙二醛(MDA)是常用的膜脂過氧化指標,在酸性和高溫度條件下,可以與硫代巴比妥酸(TBA)反應生成紅棕色的三甲川(3,5,5-三甲基惡唑-2,4-二酮),其最大吸收波長在532nm。但是測定植物組織中MDA時受多種物質的干擾,其中最主要的是可溶性糖,糖與TBA顯色反應產物的最大吸收波長在450nm,但532nm處也有吸收。植物遭受乾旱、高溫、低溫等逆境脅迫時可溶性糖增加,因此測定植物組織中MDA—TBA反應物質含量時一定要排除可溶性糖的干擾。低濃度的鐵離子能夠顯著增加TBA與蔗糖或MDA顯色反應物在532、450nm處的消光度值,所以在蔗糖、MDA與TBA顯色反應中需一定量的鐵離子,通常植物組織中鐵離子的含量為每克千重100—300ug/g,根據植物樣品量和提取液的體積,加入Fe3+的終濃度為0.5umol/L。
二:試劑
1:質量分數為10%三氯乙酸(TCA);
2:質量分數0.6%硫代巴比妥酸:先加少量的氫氧化鈉(1mol·L-1)溶解,再用10%的三氯乙酸定容;
三:方法
1:MDA的提取 稱取剪碎的試材1g,加入2mll0%TCA和少量石英砂,研磨至勻漿,再加8mlTCA研磨,勻漿在4000r/min離心10min,上清液為樣品提取液。
2:顯色反應和測定 吸取離心的上清液2ml(對照加2ml蒸餾水),加入2ml0.6%TBA溶液,混勻物於沸水浴上反應15min,迅速冷卻后再離心。取上清液測定532、600和450nm波長下的消光度。
四:結果
C1=11.71D450
C2={6.45(D532 - D600) - 0.56D450}NW-1
C1——可溶性糖的濃度(mmol/L)
C2——MDA的濃度(·umol/L)
D450、0532、D600分別代表450、532和600nm波長下的消光度值。
N:提取液總體積(ml)
W:植物組織鮮重