斑點-ELISA

斑點-ELISA（dot-ELISA）的特點是：①以吸附蛋白質能力很強的硝酸纖維素膜為固相載體；②底物經酶反應后形成有色沉澱，使固相膜染色。在實驗室中斑點-ELISA可按下法進行。在硝酸纖維膜上用鉛筆劃成4mm×4mm的小格，在每格中央點加抗原1～2μl，成為一個小點。乾燥后將每格剪下分別放入ELISA板孔中，按ELISA方法操作，最後加入能形成不溶性有色沉澱的底物，如在膜上出現染色斑點，即為陽性反應。因硝酸纖維素膜吸附性能強，一般在包被后須再進行封閉。如將硝酸纖維素膜裁剪成膜條，並在同一張膜條上點有多種抗原，將整個膜條與同一份血清反應，則可同時獲得對多種疾病的診斷結果。斑點-ELISA的缺點是操作麻煩，特別是洗滌的操作很不方便。

圖15-11 斑點-ELISA示意圖

應用斑點-ELISA的原理，通過特殊工藝已製備出各種試劑，供臨床檢驗用。一般分三種類型：①將試劑膜粘貼在塑料條片，便於洗滌和觀察。②將試劑膜封在小盒內，膜下墊吸水劑，洗滌液通過膜吸入盒內。此即斑點免疫滲濾試驗（見第十九章）。③將試劑膜固定在小杠框格中放入特殊的自動分析儀中檢測。應用這一系統可做各種蛋白質、激素、藥物和抗生素的定量測定。