血凝實驗

抗球蛋白參與的血凝試驗由Coombs於1945年建立，故又稱為Coombs試驗，是檢測抗紅細胞不完全抗體的一種很有用的方法。所謂不完全抗體，多半是7S的IgG類抗體，能與相應的抗原牢固結合，但在一般條件下不出現可見反應。Coombs利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連接與紅細胞表面抗原結合的特異抗體，使紅細胞凝集。

經常用作試驗的有兩類方法。

將含球蛋白的試劑直接加到紅細胞表面結合抗體的細胞懸液中，即可見細胞凝集（圖13-6）。可用玻片法定性測定，也可用試管法作半定量分析。常用於新生兒溶血症、自身免疫性溶血症、特發性自身免疫性貧血和醫源性溶血性疾病等的檢測。

用以檢測遊離的血清中的不完全抗體。將受檢血清和具有待測不完全抗體相應抗原性的紅細胞相結合。再加入抗球蛋白抗體就可出現可見的紅細胞凝集（圖13-7）。此試驗多用於檢測母體Rh（D）抗體，以便及早發現和避免新生兒溶血症的發生。亦可對紅細胞不相容的輸血所產生的血型抗體進行檢測。

Coombs試驗除了廣泛應用於血液病的檢測外，還可採用專一特異性的抗球蛋白的血清如IgG血清、抗IgA或抗IgM以及抗補體血清等，分析結合於紅細胞上的不完全抗體的免疫球亞類。

有些病毒具有凝集某種(些)動物紅細胞的能力，稱為病毒的血凝，利用這種特性設計的試驗稱血球凝集(HA)試驗，以此來推測被檢材料中有無病毒存在，是非特異性的，但病毒的凝集紅細胞的能力可被相應的特異性抗體所抑制，即血球凝集抑制(HI)試驗，具有特異性。通過HA-HI試驗，可用已知血清來鑒定未知病毒，也可用已知病毒來檢查被檢血清中的相應抗體和滴定抗體的含量。

掌握病毒HA和HI試驗的原理和基本操作方法，了解其實用價值。

1. 96孔“U”形或“V”形微量反應板，50L定量移液器，滴頭，微型振蕩器。

2. 生理鹽水，0.5% 雞紅細胞懸液。

3. 新城疫病毒液（尿囊液或凍干疫苗液），新城疫陽性血清，被檢雞血清。

血球凝集(HA)試驗

1. 在96孔微量反應板上進行，自左至右各孔加50mL生理鹽水。

2. 於左側第1孔加50mL病毒液（尿囊液或凍干疫苗液），混合均勻后，吸50mL至第2孔，依次倍比稀釋至第11孔，吸棄50mL；第12孔為紅細胞對照。

3. 自右至左依次向各孔加入0.5% 雞紅細胞懸液50mL，在振蕩器上振蕩，室溫下靜置后觀察結果（表4-1）。

表 4-1 病毒血凝試驗的操作方法（單位：L）

孔 號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

病毒稀釋度 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 對照

生理鹽水 50

50

50

50

50

50

50

50

50

50

50

50

病毒液 50

50

50

50

50

50

50

50

50

50

50

0.5%紅細胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50

棄50

結果觀察 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++ + + - -

從靜置后10 min開始觀察結果，待對照孔紅細胞已沉澱即可進行結果觀察。紅細胞全部凝集，沉於孔底，平鋪呈網狀，即為100% 凝集（++++），不凝集者（-）紅細胞沉於孔底呈點狀。

以100% 凝集的病毒最大稀釋度為該病毒血凝價，即為一個凝集單位。從表4-1看出，該新城疫病毒液的血凝價為1:128，則l:128為1個血凝單位，1:64、l:32分別為2、4個血凝單位，或將128/4=32，即1:32稀釋的病毒液為4個血凝單位。