SEC

尺寸排阻層析

目錄

正文


Size-Exclusion Chromatography, SEC,又稱
凝膠過濾層析(Gel Filtration Chromatography,GFC)
凝膠滲透層析(Gel Permeation Chromatography,GPC
分子篩層析(Molecular Sieve Chromatography,MSC)
在高效液相色譜分析中,用GFC或SEC表示凝膠過濾色譜或尺寸排阻色譜,流動相通常是水溶液;在有機高分子分析中,常用GPC表示凝膠滲透色譜,流動相通常是有機溶劑;在蛋白質分離純化中用GFC或SEC表示凝膠過濾層析或尺寸排阻層析;本文以下內容均針對蛋白質分離,因此均以凝膠過濾層析(GFC)表示。
分離機理
填料是由高分子交聯而成、內部具有網狀篩孔的固體顆粒,利用球狀凝膠內的篩孔的大小,不同水力學半徑的分子在通過填料時運行路徑存在差異,利用該差異將不同大小的蛋白質進行分離。
蛋白質分子流過填充凝膠的管柱時,大分子無法進入凝膠篩孔,而只流經凝膠及管柱間的孔隙,因此總體運行路徑較短,從層析柱入口到出口所需時間較短;較小的分子因為進入凝膠內的篩孔,總體運行路徑較長,故在管柱內的停留時間較長;基於此原理可以區分大小不同的分子,亦可與已知大小的分子作比較而確定未知樣品的分子量。
球形蛋白與線性分子在凝膠過濾層析中的保留行為存在差異,因此使用球形蛋白製作的分子量標準曲線不能用於明膠多肽、澱粉或其它聚合物。