細菌總數

水中通常存在的細菌大致可分為三類：①天然水中存在的細菌。普通的是熒光假單孢桿菌、綠膿桿菌，一般認為這類細菌對健康人體是非致病的。②土壤細菌。當洪水時期或大雨後地表水中較多。它們在水中生存的時間不長，在水處理過程中容易被去除。腐蝕水管的鐵細菌和硫細菌也屬此類。③腸道細菌。它們生存 在溫血動物的腸道中，故糞便中大量存在。水體中發現這類細菌，可以認為已受到糞便的污染。致病性腸道細菌有沙門氏桿菌（傷寒和副傷寒菌）、B型炭疽菌、痢疾志賀氏菌和霍亂弧菌等。

細菌總數計數的研究已有很多，目前國標規定的方法為平板計數法，其檢驗方法是：在玻璃平皿內，接種一毫升水樣或稀釋水樣於加熱液化的營養瓊脂培養基中，冷卻凝固后在37°C培養24小時，培養基上的菌落數或乘以水樣的稀釋倍數即為細菌總數。有的國家把培養溫度定為35°C或其他溫度，也有把培養時間定為48小時的。這種方法精度高，但耗時長，難以滿足實際工作需要。為了簡化檢測程序、縮短檢 測時間，國內外學者進行了大量的快速檢測方法的研究，提出了阻抗檢測法、Simplate TM全平器計數法、微菌落技術、紙片法等檢測方法，取得了一定的成果，但檢測時間仍在4 h以上。

本研究在分析了已有研究成果的基礎上，提出了在濾膜上染色后，直接計數的細菌總數檢測方法，具體步驟為：用集菌儀進行細菌收集→在膜上進行染色→在油鏡下計數→按公式計算出菌液濃度。實驗結果表明，該方法與傳統的平板培養法無顯著性差異，檢測時間約1 h，是一種快速的細菌總數檢測方法。

本研究中用的試驗材料有：集菌儀，染色劑，生物顯微鏡，聚碳酸脂膜（直徑47 mm）。

準備工作卸下集菌儀的濾網（見圖1），統計濾網上小孔總數，為計算菌液濃度做準備。另外，還需對集菌儀中的集菌器進行高壓滅菌，以防止過濾過程中引入外源細菌。

細菌收集取一定濃度的黴菌菌液300～500 ml，裝在集菌儀上，集菌儀採用蠕動加壓方式對菌液施加一定的壓力，使菌液流過孔徑為0.45 um的聚碳酸脂膜。採用過濾方法是因為它可以使細菌相對均勻地分佈在濾膜上，而選用聚碳酸脂膜是因為這種膜具有良好的透光性，便於用顯微鏡觀察。

染色集菌后取下濾膜，切下一部分放在載玻片上，進行染色、固定。染色的目的是增大細菌與背景的對比度，便於觀察。

顯微鏡計數與計算菌液經集菌儀過濾后，細菌在濾膜上的分佈見圖2、圖3，由圖可以看出細菌分佈具有以下兩個特點：一是細菌集中在一個個的圓形區域內，這些圓形區域和擋板的小孔相對應；二是各個圓形區域之間細菌很少。根據膜上細菌分佈的這種特點，提出以圓形區域為單位進行計數，統計出圓形區域內細菌的平均個數，從而計算出菌液中細菌總數。具體步驟如下：隨機選擇10個圓形區域，在油鏡下，調節焦距以獲得較清晰的圖像，統計每個圓形區域內的細菌個數，然後按公式計算出菌液的濃度。

影響因素

計算公式的改進用集菌儀對樣本菌液進行過濾時，由於濾網擋板的作用，使得細菌不是均勻地分佈在整個濾膜上，而是集中分佈在濾網的小孔處，所以，計算細菌總數時，不能採用公式X=A40×Φ1Φ22/V（其中Φ1，Φ2分別為濾膜直徑和視野直徑），該公式是微菌落方法檢測細菌總數中的常用計算公式。在本實驗中，根據細菌分佈的特點，提出以圓形區域為單位計算細菌總數的思路，使計算結果更接近真實值，從而提高了檢測精度。

細菌大小的影響細菌大小對本實驗的影響主要體現在鏡檢時，如果細菌太小，顯微鏡計數時不能將細菌從背景中分辨出來，我們的實驗結果顯示，不能分辨大腸桿菌和葡萄球菌，而較大的黴菌可以清晰地分辨。

檢測時間進一步縮短細菌總數的經典檢測方法是平板培養法，得到的結果精度高，但是它所用時間長，為了縮短檢測時間，出現了微菌落法，將檢測時間縮短為4 h左右。本研究不對細菌進行培養，而是在膜上染色后直接用顯微鏡計數，最大限度地縮短了檢測時間，使整個檢測時間在1 h左右。

中國頒布的生活飲用水水質標準規定每毫升水的細菌總數不得超過100個。