二硫腙比色法

樣品經消化后，在時，鋅離子與二硫腙生成紫紅色配合物，溶於四氯化碳，與標準系列相比較進行定量。

1.乙酸鈉溶液：稱取68g乙酸鈉，加水稀釋至250ml。

2.乙酸溶液：量取10.0ml冰乙酸，加水稀釋至85ml。

3.乙酸-乙酸鹽緩衝溶液乙酸鈉溶液與乙酸溶液等體積混合，此溶液PH為4.7左右。用0.01%二硫腙四氯化碳溶液提取數次，每次10ml，除去其中的鋅，至四氯化碳層綠色不變為止，棄去四氯化碳層，再用四氯化碳提取乙酸-乙酸鹽緩衝液中過剩的二硫腙，至四氯化碳層無色，棄去四氯化碳層。

4.1:1氨水。

5.鹽酸：最取10ml鹽酸，加水稀釋至60ml。

6.鹽酸：吸取鹽酸，加水稀釋至100ml。

7.酚紅指示劑：0.1%乙醇溶液。

8.20%鹽酸羥胺溶液：稱取20g鹽酸羥胺，加60ml水，滴加1:1氨水，調節PH至4.0-5.5，以下操作同乙酸-乙酸鹽緩衝溶液的處理。然後加水稀釋至100ml。

9.25%硫代硫酸鈉溶液：用乙酸溶液調節PH至4.0-5.5。以下按試劑3中用0.01%二硫腙-四氯化碳溶液，處理。

10.0.01%二硫腙-四氯化碳溶液。

11.二硫腙使用液：吸取1.0ml的二硫腙-四氯化碳溶液，加四氯化碳至10.0ml，混勻。用1cm比色杯，以四氯化碳調節零點，於波長530nm處測吸光度(A)，用下式計算出配製100ml的二硫腙使用液(57%透光率)所需0.01%二硫腙-四氯化碳溶液毫升數(V)。

12.鋅標準溶液：準確稱取0.1000g鋅，加鹽酸，溶解后移入1000ml溶量瓶中，加水稀釋至刻度。此溶液每毫升相當於100μg。

13.鋅標準使用液：吸取1.0ml鋅標準溶液，置於100ml的容量瓶中，加鹽酸，以水稀釋至刻度。此溶液每毫升相當於1μg鋅。

分液漏斗、分光光度計。

1.樣品的消化：同“砷的測定”中硝酸-高氯酸-硫酸法或硝酸-硫酸法。

2.標準曲線的繪製

吸取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml鋅標準使用液，分別置於125ml分液漏斗中，各加入鹽酸至20ml。漏斗中，備加兒鹽酸至20m1。然後分別加入10ml乙酸-乙酸鹽緩衝液、1m125%硫代硫酸鈉溶液，搖勻，再各加入10.0ml二硫腙使用液，劇烈振搖2min。靜置分層后，四氯化碳層經脫脂棉濾入lcm比色杯中，以零管調節零點，于波長530nm處測定吸光度、繪製標準曲線或求出回歸方程。

3.樣品溶液和試劑空白液油定

吸取5.0ml~10.0ml消化后定容的樣品溶液和相同量的試劑空白液，分別置於125m1分液漏斗中，加5m1水、0.5ml20%鹽酸羥胺溶液，搖勻，再加2滴酚紅指示劑，用1:1氨水調至紅色，再多加2滴。再加5ml 0.01%二硫腙-四氯化碳溶液，劇烈振搖2min，靜置分層。將四氯化碳層移入另一分液漏斗中，水層用少量二硫腙-四氯化碳溶液振搖提取，每次2mL~3ml，直至二硫腙-四氯化碳溶液綠色不變為止。合併提取液，用5m1水洗滌，四氯化碳層用鹽酸提取2次，每次10ml，提取時劇烈振搖2min，合併鹽酸提取液，並用少量四氯化碳洗去殘留的二硫腙。以下自“加入l0ml乙酸-乙酸鹽緩衝溶液”起，按標準曲線繪製操作方法進行操作。根據測得吸光度從標準曲線上查得相當於鋅的含量，或將吸光度代入回歸方程求得鋅的含量。

式中：

a1——測定用樣品消化液中鋅的含量(μg)

a0——試劑空白液中鋅的含量(μg)；

m——樣品質量(體積)[g(ml)]；

V1——樣品消化波速體積(nII)；

V2——測定用樣品消化液的體積(m1)。

1.測定時加入硫代硫酸鈉、鹽酸羥胺和在控制pH值的條件下，可防止銅、汞、鉛、鉍、銀和鎘等離子的干擾。並能防止二硫腙被氧化。

2.所用玻璃儀器用10%一20%硝酸浸泡24h以上，然後用不含鋅的蒸餾水沖洗潔凈。

3.硫代硫酸鈉是較強的配合劑，它不僅配合干擾金屬，同時也與鋅配合．所以只有使鋅從配合物中釋放出來，才能被二硫腙提取，而鋅的釋放又比較緩慢，因此必須劇烈根據2min。