雙硫腙比色法

l、 1：1氨水；

2、鹽酸：量取100毫升鹽酸，加水稀釋至200ml。

3、酚紅指示液：0.1%乙醇溶液。

4、 20%鹽酸羥胺溶液：稱取20克鹽酸羥胺，加水溶解至約50ml，加2滴酚紅指示液，加1：1氨水，調PH至8.5-9.0(由黃變紅，再多加2滴)用雙硫腙-三氯甲烷溶液提取至三氯甲烷層綠色不變為止，棄去再用三氯甲烷洗二次，棄去三氯甲烷層，水層加6N鹽酸呈酸性，加水至100毫升。

5、 20%檸檬酸銨溶液：稱取50克檸檬酸銨，溶於100毫升水中，加2滴酚紅指示液，加l：1氨水，調PH至8.5-9.0，用雙硫腙-三氯甲烷溶液提取數次，每次10-20ml，至三氯甲烷層綠色不變為止，棄去三氯甲烷層，再用三氯甲烷洗二次，每次5ml，棄去三氯甲烷層，加水稀釋至250毫升。

6、 10%氰化鉀溶液；

7、三氯甲烷；不應含氧化物。檢查方法：量取10ml三氯甲烷，加25ml新煮沸過的水，振搖3分鐘，靜置分層后，取10ml水液，加數滴15%碘化鉀溶液及澱粉指示液，振搖后應不顯藍色。

處理方法：於三氯甲烷中加人工1/10-1/20體積的20%硫酸鈉溶液洗滌，再用水洗后加入少量無水氯化鈣脫水後進行蒸餾，棄去最初及最後的l/10餾出液，收集中間餾出液備用。

8、澱粉指示液：稱取0.5克可溶性澱粉，加5ml水攪勻后，慢慢倒入lOOml沸水中，隨到攪拌，煮沸，放冷備用。用時配製。

9、 1%硝酸：量取1ml硝酸，加水稀釋至100ml。

10、雙硫腙溶液：0.5%三氯甲烷溶液，保存冰箱中，必要時用下述方法純化。稱取0.5克研細的雙硫腙，溶於50ml三氯甲烷中，如不全溶；可用濾紙過濾於250m1分液漏斗中，用1：99氨水提取三次，每次100ml，將提取液用棉花過濾至500m1分液漏斗中，用6N鹽酸調至酸性，將沉澱出的雙硫腙用三氯甲烷提取2-3次，每次20ml，合併三氯甲烷層，用等量水洗滌二次，棄去洗滌液，在50℃水浴上蒸去三氯甲烷。精製的雙硫腙置硫酸乾燥器中，乾燥備用。或將沉澱出的雙硫腙用200，200，100ml三氯甲烷提取三次，合併三氯甲烷層為雙硫腙溶液。

11、雙硫腙使用液：吸取1.Oml雙硫腙溶液，加三氯甲烷至10ml，混勻。用：1cm比色杯，以三氯甲烷調節零點，於波長510nm處測吸光度(A)下式用算出配製100m1雙硫腙使用液(70%透光率)所需雙硫腙溶液的毫升數(N)。

V =(10(2-lg70))/A=1.55/A

12、鉛標準溶液：精密稱取0.1598克硝酸鉛，加10ml1%硝酸，全部溶解后，移入100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，此溶液每毫升相當於lml鉛。13、鉛標準使用液：吸取1.0ml鉛標準溶液，置於100毫升容量瓶中，加水稀釋至刻度。此溶液每毫升相當於10μg鉛。

汞的測定：樣品經消化，后汞離子在酸性溶液中可與二硫腙生成橙紅絡合物，溶於三氯甲烷，與標準系列比較定量。

鋅的測定：樣品經消化，鋅在弱酸條件下（PH4.0~5.5），與雙硫腙生成紫紅色絡合物，溶於四氯化碳，加入硫代硫酸鈉，防止銅、汞、鉛、鉍、銀和鎘等離子干擾。於530nm處測定吸光度與標準系列比較定量。

1、所用玻璃儀器均用l0-20%硝酸浸泡24小時以上，用自來水反覆沖洗，最後用水沖洗乾淨。

2、分光光度計。

(1)硝酸-硫酸法

a、醬、醬油、醋、豆腐乳、醬腌菜等：稱取10.0克樣品(或吸取10.Oml液體樣品)，置於250ml定氮瓶中，加數粒玻璃珠，lOml硝酸，放置片刻，小火加熱、待作用緩和，放冷，沿瓶壁加入1%硝酸，再加熱，至瓶中液體開始變成棕色時，不斷沿瓶壁滴加硝酸有機質分解完全。加熱火力，至產生白煙，溶液應澄清無色或微帶黃色，放冷。在操作過程中應注意防止爆炸。加20ml水煮沸，除去殘餘的硝酸至產生白煙為止，如此處理兩次，放冷。將冷后的溶液移入50ml或lOOml容量瓶中用水洗滌定氮瓶，洗液並容量瓶中再放冷，加水至刻度，混勻。定容后的溶液每lml相當於2g樣品或2ml樣品。b、含酒精性飲料或二氧化碳飲料：吸取10.Oml樣，置於250ml定氮瓶中，加數粒玻璃珠，先用小火加熱除去乙醇或二氧化碳，再加lOml硝酸，混勻后，以下按(a)自“放置片刻”起依法操作，但定容后的溶液每10ml相當於2m1樣品。c、含糖量高的食品：稱取1.0克樣品，置於250ml定氮瓶中，先加少許水使濕潤，加數粒玻璃珠，10ml硝酸，搖勻，緩緩加入10ml硫酸，待作用緩和停止起泡沫后，先用小火緩緩加熱(糖分易炭化)，不斷沿瓶壁：加硝酸，待泡沫全部消失后，再加大火力，至有機質分解完全發生白煙，溶液應澄清無色或微帶黃色，放冷。以下按a自“加20ml水煮沸”起依法操作。以上濕法消化要同時作空白試驗。

(2)灰化法

a、糕點及其他含水分少的食品：稱取5.0克樣品，置於坩堝中，加：至炭化，然後移入高溫爐中，500℃灰化3小時、放冷，取出坩堝，加l ml 硝酸、濕潤灰分，用小火蒸干，在500℃灼燒1小時，放冷，取出坩堝。加lml 硝酸，加熱，使灰分溶解，移入50ml容量瓶中，用水沸滌坩堝，洗液併入容量瓶中，加水至刻度，混勻備用。b、含水分多的食品或液體樣品：稱取5.0克或5.0ml樣品，置於蒸發皿中，先在水浴上蒸於，再按a自“加熱至炭化”起依法操作。

吸取10.Oml消化后的定容溶液和同量的試劑空白液，分別置於125ml分液漏斗中，各加水至20ml。

吸取0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50ml鉛標準使用液(相當於0、 1、2、3、4、5mg鉛)分別置於125m1分液漏斗中，各加1%硝酸溶液至20ml。

於樣品消化液，試劑空白液和鉛標準液中各加2m120%檸檬酸銨溶液，lml20%鹽酸羥胺溶液和2滴酚紅指示液，用1：1氨水調至紅色，再各加2ml10%氰化鉀溶液，混勻。各加5.Oml 硫腙使用液，劇烈振搖1分鐘，靜置分層后，三氯甲烷層經脫脂棉濾人1cm比色杯中，以零點于波長5lOnm處測吸光度，繪製標準曲線比較。

X=((A1—A2)×1000)/( m×V2/V1×1000)

X：樣品中鉛的含量，mg/kg或mg/L；

A1：測定用樣品消化液中鉛的含量，mg；

A2：試劑空白液中鉛的含量，mg；

M：樣品質量(體積)，克(m1)；

V1：樣品消化液的總體積(m1)；

V2：測定用樣品消化液體積，m1。