化學發光分析法

化學發光與其它發光分析的本質區別是體系產生髮光 ( 光輻射 ) 所吸收的能量來源不同。體系產生化學發光，必須具有一個產生可檢信號的光輻射反應和一個可一次提供導致發光現象足夠能量的單獨反應步驟的化學反應。

化學發光Western 雜交檢測，是同位素檢測的一種高度靈敏的替代方法。酶標記抗體取代了放射性標記抗體，當它作用於底物時，可產生光信號。多數特異抗原檢測方法以辣根過氧化物酶(HRP)或鹼性磷酸酶(AP) 二級抗體 耦聯物為基礎。信號可通過感光膠片或專用的成像設備來採集。化學發光底物用於免疫印跡技術已有十幾年的歷史，大部分實驗室做轉印時都會採用化學發光技術進行檢測。隨著冷CCD化學發光檢測技術的發展，越來越多的實驗室都開始採用冷CCD的凝膠成像系統進行化學發光的檢測，膠片成像雖然比自然發光法靈敏度更高，但也有很多缺點：耗時，需要暗房，顯影劑和膠片，膠片較貴且為需持續購買的消耗品。同時由於膠片的線性範圍較窄，因此用膠片上的條帶（特別是表達量較低的條帶）進行定量幾乎不可能。冷CCD技術與X膠片相比具有瞬時影像處理、高靈敏度和高解析度、動力範圍廣等優點，因此能對條帶進行精確定量。當然這項技術要求底物能產生高強度長持續時間的信號，以保證信號能被冷CCD的凝膠成像系統捕獲。在這方面多家公司都提供了相應的化學發光底物或試劑盒，特別是Bio-Rad Immun-Star™ AP 化學發光試劑盒、bio-rad Western-C化學發光檢測試劑盒等。Western-C化學發光檢測試劑盒底物可產生高強度的持續光信號24小時，因此用戶可以進行多次曝光，最低可檢測至10-19mol，配合Bio-Rad屢獲大獎的化學發光成像系統ChemiDoc XRS或VersaDoc系統能得到得到高質量的印記信號。

化學發光分析法分為：

1、普通化學發光分析法 ( 供能反應為一般化學反應 ) ；

2、生物化學發光分析法 ( 供能反應為生物化學反應；簡稱 BCL) ；

3、電致化學發光分析法 ( 供能反應為電化學反應，簡稱 ECL) 等。

根據測定方法該法又可分為：

a、直接測定 CL 分析法；

b、偶合反應 CL 分析法 ( 通過反應的偶合，測定體系中某一組份；

c、時間分辨 CL 分析法 ( 即利用多組份對同一化學發光反應影響的時間差實現多組份測定 ) ；

d、固相、氣相、掖相 CL。分析法；

e、酵聯免疫 CL 分析法等。

在整個的檢測系統中其關鍵的部分為 PMT ，其直接影響到儀器的檢測性能，其最高檢測極限為 10 － 22 mol/L。不同型號的儀器其檢測技術不一樣，但基本原理都是利用待測組份與體系的化學發光強度呈線性定量關係，而化學發光強度隨體系反應進行的速度增強或衰弱。記錄儀記錄峰形，以峰高定量，也可以峰面積定量。因化學發光多為閃爍式發光 (1—2s 左右 ) ，故進樣與記錄時差短，分析速度快。