雞胚

雞胚概述

雞胚就是雞的胚胎，是研究動物發育的重要模型，已被大量用於動物發育生物學的研究。對雞胚的研究可以追溯到古希臘著名的博物學家亞里士多德，之後被很多生物學家予以深入的研究。現在對雞胚發育的過程已有清楚的了解和認識。雞胚在疫苗的開發和研究中有著不可替代的作用。

英文：chick embryo or embryonated egg

對雞胚的研究可以追溯到古希臘著名的博物學家亞里士多德，之後被很多生物學家予以深入的研究。對雞胚發育的過程已有清楚的了解和認識。雞胚在疫苗的開發和研究中有著不可替代的作用。

a．當孵化第一天，染色較深的一端為頭部，染色較淺的一端為尾部。血島、脊索原基、神經板。體節出現1—3對。

b．48小時雞胚裝片

頸曲、背曲，腦已分化為前、中、後腦三部分。體節已發展到16—23對。視、聽囊出現，心臟開始搏動。胚盤血管已形成並與體內建立了聯繫。胚體長度達9—12毫米。

c．72小時雞胚裝片

腦已清楚地分為五個部分；體節數達33對左右。前、後肢芽出現，鰓弓具有5對。尿囊出現。

d．96小時雞胚裝片

頭部顯著增大，大腦半球明顯。眼發育極快，眼內色素沉著，眼球明顯。鰓弓和鰓囊開始模糊不清，全部體節約50對左右。心臟發育已近似成體心臟。胚體已極度彎曲，大腦半球與前肢芽幾乎和尿囊接觸。

根據需要選用合適日齡的雞胚，大多數病毒適於9～12日齡的雞胚。雞胚應以白色蛋殼者為好，便於照蛋觀察。雞胚應發育正常，健康活潑，不要過大、過小或畸形蛋孵化的胚。雞胚應來自健康無病的雞群，而且不能含有可抑制所接種病毒的母源抗體，最好選用SPF雞胚或非免疫雞胚。

接種前應在照蛋器下檢查雞胚，挑出死胚和弱胚。對所有健康胚應先用紅鉛筆畫出氣室位置，再於胚胎側畫出接種位點(進針點)，接種點應避開大血管，靠近氣室邊緣處，離胚頭約1cm左右。

照蛋定位完畢后，即可開始接種。先用碘酊將接種位點和氣室消毒，再用70%酒精脫碘，然後根據需要用三棱針或20號針頭在蛋殼上打孔。

尿囊腔接種：最常用的接種方法，雞新城疫、減蛋綜合症病毒、傳染性支氣管炎病毒、法氏囊病毒等均可採用這種方法。蛋殼消毒后，先在氣室上打一小孔，再於胚胎一側近氣室處所畫位點打一小孔，用帶5～7號針頭的注射器插入孔內約1.5cm，接種接種材料0.1～0.2mL。進針時針頭與蛋殼應保持30℃角，不應垂直進針，注射完畢，立即用溶化的熱石蠟將注射口和氣室上小孔密封，然後放回37℃孵化箱孵化72～120h。

絨毛尿囊膜接種：主要用於痘病毒、喉氣管炎病毒和馬立克氏病毒等的分離培養。將卵殼消毒后，先在氣室上打一小孔，再於胚胎側靠近氣室處避開大血管用電烙鐵或鋼鋸條將蛋殼打開1個4mm見方的小口，用刀尖小心撬開蛋殼，不能損傷卵殼膜，形成卵窗。用針尖輕輕挑破卵窗中心的卵殼膜，但不能損傷卵殼膜下的絨毛尿囊膜。在針尖挑破處滴1滴滅菌生理鹽水或甘油，然後用吸頭在氣室小孔上吸氣，使胚內造成負壓，這時卵窗處絨毛尿囊膜下陷而形成人工氣室，此時可見生理鹽水或甘油迅速滲入。用注射器滴加2～3滴接種物於卵窗的絨毛尿囊膜上，以透明膠紙封住卵窗。氣室小孔用石臘密封，接種后的雞胚平放在孵化箱中，卵窗向上，不要轉運。

卵黃囊接種：適用於馬立克氏病毒、披膜病毒、衣原體及立克次氏體的分離、培養。接種方法：氣室端蛋殼消毒后，在氣室中央打一小孔，用7號針頭注射器垂直刺入約3cm，注射接種物約0.1～0.2mL。石蠟封口，繼續在37℃孵化，每天翻蛋2次。

接種後繼續在37℃孵化，每天照蛋2次，死胚隨時取出。一般24h內死亡的胚多因創傷或細菌污染所致，故棄去不用。24h以後死亡的胚，取出後放4℃冰箱，並作上記號。接種后的孵化時間長短隨病毒種類不同而不同，一般新城疫病毒、支氣管炎病毒、減蛋綜合征病毒和法氏囊病毒要孵化48～120h，喉氣管炎病毒、馬立克氏病毒要孵化48～96h，痘病毒要孵化4～5天，腦脊髓炎病毒要孵化至小雞出殼。

接種雞胚孵化到規定時間后，應從孵化器中取出放4℃環境冷凍36h左右，或在-10℃以下速凍4h左右，但不得使雞胚凍結，否則易發生溶血。冷凍完畢按下列步驟收毒。

雞胚放於蛋盤或蛋架上，氣室向上，用碘酊、酒精消毒后，以無菌鑷子敲開氣室蛋殼或去掉人工卵窗的透明膠紙，暴露卵膜。注意不要讓卵殼碎屑掉入雞胚內。尿囊液：氣室打開后，用無菌眼科鑷子慢慢撕去卵殼膜，然後夾住絨毛尿囊膜輕輕提起，用巴氏吸管刺破絨毛尿膜直接吸取尿囊液。為防止羊膜堵住吸管口，可用鑷子輕輕壓下羊膜及胎膜，然後再吸。每個雞胚一般可收8mL左右尿囊液。羊水：吸完尿囊液后，可用鑷子夾住羊膜，將巴氏吸管直接插入羊膜腔吸取羊水，然後再用鑷子提起羊膜或壓住胎兒，直至羊水收穫乾淨。相當一部分病毒羊水和尿囊液可以混合。有些不能混合，則應將兩者單收、單放。絨毛尿囊膜：如要收穫整個尿囊膜，則可在消毒、打開蛋殼、撕去殼膜后，將整個卵內容物倒出，這時絨毛尿囊膜貼在卵殼內壁上，用鑷子夾住將其撕脫下來即可。胚胎：消毒、打開氣室卵殼后，用鑷子撕破卵殼膜和絨毛尿囊膜，夾起胚胎，用剪刀剪斷卵黃帶，將胎兒放滅菌容器內即可。

（1）孵化場須遠離養殖場，以便於切斷疾病傳播，有較好的空氣環境和優質的水源，足夠時間的紫外線照射殺菌。

（2）孵化場工作人員進場前，須經紫外線照射，淋浴更衣，然後經消毒池入場。

（3）孵化器與孵化室，在孵化前和出雛后都必須經過有效的滅菌消毒。

1 、孵化室的準備

孵化室應嚴密，保溫性能良好，同時具有良好的通風設備以保證室內空氣新鮮。在孵化前對孵化室進行必要的消毒工作，如：紫外線持續照射3～5h。

2 、孵化器的準備

在孵化前，孵化器應經檢修、熏蒸、消毒後方可入孵。

3 、種蛋的消毒

種蛋要用熏蒸消毒法，每立方米高錳酸鉀1.5g，福爾馬林30ml，在27℃～30℃溫度下熏蒸20min，熏蒸后將氣體排出。

種蛋的品質既影響孵化率又影響雛雞質量，所以種蛋的選擇非常重要。

（1）種蛋的來源最好是生產性能高而穩定，無經蛋傳播的疾病（如白痢、支原體、馬立克氏病等），飼餵全價飼料和管理完善的種群。

（2）種蛋表面應清潔（蛋表無糞便或其他雜質粘連），蛋重50～65g，蛋殼顏色符合，品種要求統一，蛋形比（即短徑與長徑比）0.72：0.76。

（3）出現下列情況的種蛋應捨棄：

①太大的蛋，②太小的蛋，③雙黃蛋，④臟蛋，⑤裂紋蛋，⑥蛋殼薄而粗糙的蛋，⑦畸形蛋，⑧氣室擴大，異位或游移的蛋。

雞胚胎髮育應具有適宜的外界條件，主要包括溫度、濕度、通風、入孵位置、翻蛋、晾蛋等。

（1）孵化時所需的溫度：

溫度是家禽胚胎髮育最關鍵的因素，一般來講，溫度高，胚胎髮育快，但胚胎較弱；溫度低時，胚胎髮育遲緩，雛禽腹大，難以站立，因此孵化時應掌握適宜的溫度。胚胎髮育的適溫範圍：37℃～39.5℃ 最適溫度：37℃～38℃臨界溫度：24.9℃和42℃，在孵化過程中，常根據雞胚日齡對溫度作適當的調節，超過42℃，2～3h胚胎死亡，低於24℃，30h胚胎死亡。

（2）孵化時所適宜的濕度：

濕度的高低同樣影響胚胎的正常物質代謝，對孵化率與雛禽品質也有很大的影響。雞蛋孵化時胚胎要生成水和尿囊液，相對濕度要求較高，通常為60%～65%。孵化中、後期為排除羊水和尿囊液，可下降相對濕度為55%～65%。

（3）隨著胚齡的增大，物質代謝的提高，尿囊的發育特別是肺呼吸的形成，胚胎與外界氣體交換不斷加強，因此必須供給新鮮空氣，在保持正常的溫度和濕度的情況下，機內的通氣應保持順暢。

（4）為提高入孵量，減少胚胎異位，有利於胚胎髮育（雞胚呼吸），放蛋時必須保持大頭朝上。

（5）孵化過程中必須經常翻蛋，特別是第一周尤為重要。翻蛋可防止胚胎與殼膜粘連，由於後期生理散熱增加，翻蛋能使胚胎各部受熱均勻，增強胚胎運動。

（6）晾蛋可使孵化器內大幅度換氣，間歇的降溫可增強胚胎的活力。

（1）初檢，應在5日齡時進行。要及時檢出無精蛋、破殼蛋、死胚蛋，觀察胚胎髮育情況，及時調整孵化條件。

（2）二照，應在19日齡時進行。檢查出破殼蛋、死胚蛋，同時為移盤和創造良好的出雛環境提供依據。

（3）出現血管環及胚胎在前期（1～6d）死亡的，在孵化過程中出現臭蛋的要及時查出並移除。

溫度是種蛋孵化最重要的條件。胚胎髮育要有一定的溫度，只有保證胚胎正常發育所需要的適宜溫度，才能獲得較高的孵化率和健康的雛雞。雞孵化比較適宜的溫度是恆定37.8℃（36.5～38.5℃），若溫度偏高，則胚胎髮育過速，提前出雛，胚胎死亡率增加。若溫度偏低，胚胎髮育遲緩，出雛時間落後，死亡增多。

濕度對雞的胚胎髮育也起很大的作用，但胚胎對相對濕度的適應範圍要比對溫度的適應範圍廣一些，一般要求達到40～70%。在孵化初期（1～7d），胚胎需要形成羊水、尿囊液，濕度要求為60～65%；孵化中期（8～18d），因為胚胎的羊水、尿囊液需要排出，濕度應為50%；孵化後期（19～21d），小雞即將出殼，一般在70%左右。

通風換氣非常重要。蛋周圍空氣中的二氧化碳含量不得超過0.5%，超過1%時胚胎髮育緩慢，死亡率高，弱雛增加。因此，孵化時必須保持恆溫箱內空氣新鮮，通氣孔的大小和位置適當，風扇轉速適中。孵化初期通氣孔可不必打開，但孵化中後期，通氣孔一定要打開。

免疫系統是一個由細胞和分子組成的複雜網路系統，它是在胚胎形成的不同時期形成並出雛后發育。因此，雞需要在出雛數周后才能形成完全成熟的免疫系統。這一發育過程及其免疫方式(體液免疫或細胞免疫)不僅受家禽基因型的影響，還受到父母代和子代水平上環境中的免疫調節因子的影響，這些因子包括溫度應激、雞群社會應激。尤其是病毒性病原體和腸道菌群的構成方式可能會影響免疫系統的發育，而後者可能會因出雛后的開食和飼料的組成而變化。幾乎所有的免疫細胞都擁有針對一種或多種應激、代謝、性激素和內分泌信號分子的受體。