異硫氰酸胍
白色結晶狀化學物質
異硫氰酸胍是一種化學物質,分子式是CH5N3·HSCN。
簡稱 GITC
外觀:白色結晶
熔點:115-120℃
PH(4%水溶液):4.5-7.0
紫外吸收(300nm,6M):≤0.1 abs unit
紫外吸收(410nm,6M):≤0.05abs unit
乾燥失重:≤0.5%
異硫氰酸胍法提取製備模板核酸此法主要用於RNA的提取。標本為組織細胞及血清等.
1.異硫氰酸胍消化液
異硫氰酸胍4mol/L
檸檬酸鈉(PH7.0)25mmol/L
十二烷基肌酸鈉0.5%
β-巰基乙醇0.1mol/L
2.消化方法:用50~100ul細胞懸液及血清,加等體積的異硫氰酸胍消化液振混勻后,或65℃1小時,或室溫放置數分鐘,然後加1/10體積的3mmol/LpH5.2的醋酸鈉緩衝液,再加等體積的酚:氯仿,用力振搖約10s,10000r/min,離心5min,取上清加等體積異丙醇-20℃放置3h后,14000r/min離心15min,沉定用75%冰冷乙醇離心洗滌1~2次,真空乾燥,沉澱用TE緩衝液溶解即可用於逆轉錄PCR擴增,或放-20℃保存。