狹義的酯酶也有指水解低級脂肪酸酯的脂肪酶。再者蛋白酶催化氨基酸等的酯水解反應時，也具有酯酶作用。根據反應條件不同反應也可逆行，但在生理上是向分解方向進行的。另外，也有進行基團轉移反應的，則不易與轉移酶（transfe－rase）區別。
可在水分子的參與下，經由水解作用，將酯類切割成酸類與醇類。此類酶參與多種生物化學反應，依其專屬受質、蛋白質結構，以及功能而有不同。
酯+H2O→酸+OH化合物。
按照作用的底物的種類進行分類：
（2）硫酯；
（3）磷酸單酯，磷酸單酯酶，例如鹼性磷酸酶；
（5）硫磷酸酯；
（6）硫酸酯，硫酸酯酶。（數字為酶編號的第三位數字）。
