活菌計數

將待測樣品經一系列10倍稀釋，然後選擇三個稀釋度的菌液，分別取0.2ml放入無菌平皿，再倒入適量的已熔化並冷至45℃左右

的培養基，與菌液混勻，冷卻、待凝固后，放入適宜溫度的培養箱或溫室培養，長出菌落後，計數，按下面公式計算出原菌液的含菌數：

每毫升原菌液活菌數=同一稀釋度三個以上重複平皿

菌落平均數×稀釋倍數×5

此法還可以將稀釋的菌液取0.2m1加到已製備好的平板上，然後用無菌塗棒將菌液塗布整個平板表面，放入適宜溫度下培養，計算菌落數，再按上公式計算出每毫升原菌液的所含活菌總數。

此法可因操作不熟練造成污染，或因培養基溫度過高損傷細胞等原因造成結果不穩定。儘管如此，由於該方法能測出樣品中微量的菌數，仍是教學、科研和生產上常用的一種測定細菌數的有效方法。土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽抱與抱子等的數量均可用此法測定。但不適於測定樣品中絲狀體微生物，例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等。

除上述兩種常用的計數方法外，還有膜過濾法、比濁法。膜過濾法是當樣品中菌數很低時，可以將一定體積的湖水、海水或飲用水等樣品通過膜過濾器。然後將濾膜乾燥、染色，並經處理使膜透明，再在顯微鏡下計算膜上(或一定面積中)的細菌數；比濁法原理是在一定範圍內，菌的懸液中細胞濃度與混濁度成正比，即與光密度成正比，菌越多，光密度越大。因此可以藉助於分光光度計，在一定波長下，測定菌懸液的光密度，以光密度(O．D．)表示菌量。實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性範圍內，否則不準確。微生物計數法，發展迅速，現有多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法。

原理：將1cm2×0.1mm的薄層空間劃分為400小格，從中均勻分佈地選取80或100小格，計數其中的細胞數目，換算成單位體積中的細胞數。

適用範圍：個體較大細胞或顆粒，如血球、酵母菌等。不適用於細菌等個體較小的細胞，因為（1）細菌細胞太小，不易沉降；（2）在油鏡下看不清網格線，超出油鏡工作距離。

特點：快速，準確，對酵母菌可同時測定出芽率，或在菌懸液中加入少量美藍可以區分死活細胞。

平板活菌計數法

★技術要求：樣品充分混勻，操作熟練快速（15~20min完成操作），嚴格無菌操作。

★注意事項：每一支吸管只能用於一個稀釋度，樣品混勻處理，傾注平板時的培養基溫度。

★適用範圍：中溫、好氧和兼性厭氧、能在營養瓊脂上生長的微生物。

★誤差：多次稀釋造成的誤差是主要來源，其次還有由於樣品內菌體分佈不均勻、以及不當操作。