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- 染色體步移
- Chromsome walking
染色體步移
染色體步移
染色體步移（Chromosome walking）是用以鑒定已經克隆的特定DNA片段側翼順序的方法。
從第一個重組克隆插入片段的一端分離出一個片段作為探針從文庫中篩選第二個重組克隆，該克隆插入片段含有與探針重疊順序和染色體的其他順序。從第二個重組克隆的插入片段再分離出末端小片段篩選第三個重組克隆，如此重複，得到一個相鄰的片段，等於在染色體上移了一步，故稱之為染色體步移（Chromosome Walking）染色體步移技術（genome walking）是一種重要的分子生物學研究技術，使用這種技術可以有效獲取與已知序列相鄰的未知序列。
利用已知的基因或分子標記來篩選大片段的DNA文庫獲得陽性克隆，如此得到的陽性克隆是“一次克隆”’，利用獲得的克隆作為探針對文庫進行第二次雜交，得到與探針具有重複序列的陽性克隆稱為“二次克隆”，如此反覆即可得到需要的克隆，獲得目的基因。
①根據已知的基因或分子標記連續步移，獲取人、動物和植物的重要調控基因，可以用於研究結構基因的表達調控。如分離克隆啟動子並對其功能進行研究；
②步查獲取新物種中基因的非保守區域，從而獲得完整的基因序列；
③鑒定T-DNA或轉座子的插入位點，鑒定基因槍轉基因法等轉基因技術所導致的外源基因的插入位點等；
④用於染色體測序工作中的空隙填補，獲得完整的基因組序列；
⑤用於人工染色體PAC、YAC和BAC的片段搭接。
對於基因組測序已經完成的少數物種（如人、小鼠、線蟲、水稻、擬南芥等）來說，可以輕鬆地從資料庫中找到某物種已知序列的側翼序列。但是，對於大多數生物而言，在不了解它們的基因組序列以前，想要知道一個已知區域兩側的DNA序列，只能採用染色體步移技術。
以PCR技術為基礎的染色體步移的主要問題是，在預先不了解未知區域序列信息的情況下，如何設計兩個特異性引物來擴增未知區域。而傳統的染色體步移方法，如：反向PCR法、連接接頭法等，都有操作複雜、非特異性擴增、連接效率低等弊端。
TaKaRa新產品之Genome Walking Kit試劑盒是一種根據已知基因組DNA序列，高效獲取側翼未知序列的試劑盒。相對於其它傳統方法，本試劑盒具有高效、簡便、特異性高、靈敏度高、一次性獲得的未知序列較長等特點。其主要原理是根據已知DNA序列，分別設計三條同向且退火溫度較高的特異性引物（SP Primer），與試劑盒中提供的四種經過獨特設計的退火溫度較低的兼并引物，即AP1、AP2、AP3、AP4進行熱不對稱PCR反應。
通常情況下，其中至少有一種簡併引物可以與特異性引物之間利用退火溫度的差異進行熱不對稱PCR反應，通過三次巢式PCR反應即可獲取已知序列的側翼序列。如果一次實驗獲取的長度不能滿足實驗要求時，還可以根據第一次步移獲取的序列信息，繼續進行側翼序列獲取。此外，本試劑盒中還含有Control DNA及Control Primer，可以方便進行Control實驗。
