基因探針技術

基因探針技術

基因探針技術又稱分子雜交技術,是利用DNA分子的變性、復性以及鹼基互補配對的高度精確性,對某一特異性DNA序列進行探查的新技術。基因探針是利用同位素生物素等標記的特定DNA片斷,該片斷可大至寄生蟲基因組DNA,小至20個鹼基

基本介紹


基本原理是:互補的DNA單鏈能夠在一定條件下結合成雙鏈,即能夠進行雜交。這種結合是特異的,即嚴格按照鹼基互補的原則進行,它不僅能在DNA和DNA之間進行,也能在DNA和RNA之間進行。
用一段已知基因的核酸序列作出探針,與變性后的單鏈基因組DNA接觸時,如果兩者的鹼基完全配對,它們即互補地結合成雙鏈,從而表明被測基因組DNA中含有已知的基因序列
進行基因檢測有兩個必要條件,一是必需的特異的DNA探針;二是必需的基因組DNA。當兩者都變性呈單鏈狀態時,就能進行分子雜交。一、基因探針基因探針(probe)就是一段與目的基因或DNA互補的特異核苷酸序列,它可以包括整個基因,也可以僅僅是/基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之轉錄而來的RNA。
探針的來源 DNA探針根據其來源有3種:一種來自基因組中有關的基因本身,稱為基因組探針(genomic probe);另一種是從相應的基因轉錄獲得了mRNA,再通過逆轉錄得到的探針,稱為cDNa 探針(cDNa probe)。與基因組探針不同的是,cDNA探針不含有內含子序列。此外,還可在體外人工合成鹼基數不多的與基因序列互補的DNA片段,稱為寡核苷酸探針。
3.探針的標記 為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交,有必要對探針加以標記,以便在結合部位獲得可識別的信號,通常採用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。