福林試劑,是多種化合物配製成的混合物,可用比色法測定。
蛋白質或
多肽分子中有帶酚基酪氨酸或色氨酸,在
鹼性條件下,可使酚試劑中的
磷鉬酸化合物還原成藍色(生成
鉬藍和鎢藍化合物)。藍色的深淺與蛋白質的含量成正比,可用比色法測定。
於2000ml磨口迴流裝置內加入
鎢酸鈉(Na2WO4·2H2O)100g,
鉬酸鈉(NaMoO4·2H2O)25g。水700ml,85%的
磷酸50ml,
濃鹽酸100ml,文火迴流10h,加入
硫酸鋰(Li2SO4)150g,蒸餾水50ml,混勻取去
冷凝器,加入幾滴液體溴,再蒸沸15min,以驅逐殘溴及除去顏色,溶液應呈黃色。若溶液有綠色,需再加數滴
液溴,再蒸沸除去,冷卻后定容至1000ml,過濾,濾液置於棕色瓶中。
將1ml標準蛋白溶液和5ml0.025mol/lPH7.5的
磷酸緩衝液加入
試管中,在40℃保溫10min,迅速加入1ml酶液,保溫15min后加入3ml10%的
三氯乙酸中止反應。取濾液1ml加入0.55M的
碳酸鈉溶液5ml和福林試劑0.5ml,40℃水浴10min顯色,在
OD680處比色。