Tm值
Tm值
Tm值就是DNA熔解溫度，指把DNA的雙螺旋結構降解一半時的溫度。不同序列的DNA，Tm值不同。DNA中G－C含量越高，Tm值越高，成正比關係。當核酸達到Tm值時，其260nm吸收量可增加百分之四十（紫外吸收量隨解體程度而增加，直至完全解體。這些包括雜交分子（DNA或RNA），其長度的性質，雜交環境（鹽濃度和變性劑），探針濃度，並且它們的序列。該方程是在0.9 M氯化鈉短（14-20聚體）是有用的。當目標和探頭都是免費的溶液中，加入7-8℃，到TD。自我互補鏈，術語“CT /4”被替換為衣原體。
目錄
核酸Tm值（解鏈溫度）計算
評價標準是核酸所吸收的光線量達到其所增加吸收260nm光線的量的兩倍達到的溫度，
長度為25mer以下的引物，Tm計算公式為：Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)
對於更長的寡聚核苷酸，Tm計算公式為：
Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) – 600/size
公式中，Size = 引物長度。
多種因素影響雜交的DNA的兩條鏈之間的效率。
為膜結合的目標和中等長度的DNA探針，豪利等確定的融解溫度（Tm），在該探針的50%進行退火以它的互補鏈被定義為：
TM =81.5+16.6logM+41（%G +%C） - 500/ L - 0.62F
其中
M =摩爾一價陽離子的濃度
%XG或C = G和C核苷酸的各餾分中的探針
L =長度退火的產物
F =摩爾甲醯胺濃度
例如，與序列AGGTCATTG短寡核苷酸探針在75 mM的溶液未經甲醯胺具有預測的T m=81.5+16.6log（0.075）+ 41（0.33±0.11） - 9分之500 - 0.62（0）
=24.1℃，
這個方程是不適合的探針小於約50個核苷酸。這個等式的修飾包括
RNA的TM =79.8+18.5logM+58.4（%G +%C）11.8（%G +%C）2-820/ L-0.35F
一種RNA-DNA雜交=79.8+18.5logM+58.4（%G +%C）11.8（%G +%C）2-820/ L-0.50F的TM
較大的數字反映了RNA形成雜交的穩定性增加。
對於寡核苷酸，華萊士等確定
TD= 2（A + T）4（C+ G），其中TD =溫度（℃），其中所述寡核苷酸的50%被退火到其膜結合的互補序列。在探頭的每個特定核苷酸的數目被插入方程代替字母。該方程是在0.9 M氯化鈉短（14-20聚體）是有用的。
例如：對於序列AGGTCATTG，在TD =2（2+3），4（1+3）=26°C
當目標和探頭都是免費的溶液中，加入7-8℃，到TD。
熔融溫度在溶液中通過繪製OD相對於溫度來確定。 S形曲線的中間點是熔融溫度。
熔點的其他估計基於近鄰分析（由Genosys5審查）已被確定為DNA3或RNA4。布雷斯勞爾，等發現，熔化DNA雙鏈的行為是其一級序列可預測的。
在這裡，
TM =1000（DH）/[A + DS）+喉返神經（CT /4）] - 273.15+16.6log（鈉離子）。
其中
DH =的近鄰焓變的和移動的一個基站在同一時間，通過序列
A =校正配對的起始（=-10.8）
DS =最近鄰熵的變化的總和
R =1.987卡度-1摩爾-1）
克拉是鏈的摩爾濃度。
自我互補鏈，術語“CT /4”被替換為衣原體。
DH和DS的值示於表中。
Nearest Neighbor DH DNA （千卡/摩爾） DH RNA（千卡/摩爾）DS DNA （千卡/摩爾）; DNA DS RNA （千卡/摩爾）
AA or TT - 9.1 - 6.6 -24.0 -18.4
AT - 8.6 - 5.7 -23.9 -15.5
TA - 6.0 - 8.1 -16.9 -22.6
CA or TG - 5.8 -10.5 -12.9 -27.8
GT or AC - 6.5 -10.2 -17.3 -26.2
CT or AG - 7.8 - 7.6 -20.8 -19.2
GA or TC - 5.6 -13.3 -13.5 -35.5
CG -11.9 - 8.0 -27.8 -19.4
GC -11.1 -14.2 -26.7 -34.9
GG -11.0 -12.2 -26.6 -29.7